温和灸联合间充质干细胞移植对肛门括约肌损伤修复及归巢机制研究

Fecal incontinence(FI) referred to inability to hold solid or liquid stool. It is a refractory diseases and seriously affect the patiences' quality of life . .On the basis of mesenchymal stem cell(MSC) therapy for sphincter injury and warm-moxibustion for wound repair,the study is to investigate the influnce of combination of mid-moxibustion and MSC therapy on anal sphincter and to detect the mechanism of mid-moxibustion for MSC homing..Myoelectricity and resting pressure of anal sphincter are measured to evaluate the anal function.Wound repair is observed by HE and Masson stain and differentiation assay of MSC is by immunofluorescence. Cytology and molecular biology techniques,such as Gene Array and Real time PCR,are used to detect αsmooth muscle actin,Myogenin,Desmin,SDF-1（CXCR4）and MCP-3 （CCR1/CCR2）expression of midwarm-moxibustion for anal sphinctr wound repair.Thus to explore the specific meaning of midwarm-moxibustion on stem cell homing from the perspective of Traditional Chinese Medicine theory collaterals xu yu.

肛门失禁(FI)是指各种原因引起的不能随意控制液体和固体粪便排出，严重影响患者生活治疗，是一种难治性疾病。.在应用间充质质干细胞治疗括约肌损伤及温和灸对创面修复研究的基础上，通过不同温和灸治疗时间联合干细胞移植，观察对括约肌功能及组织修复的作用及温和灸治疗时间对间充质干细胞归巢的影响。采用测定括约肌肌电、静息压及最高收缩压的生理实验方法，进行肛门功能评定。通过HE、Masson组织染色，观察组织修复，通过检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、肌生成素(Myogenin，F5D)、结蛋白(Desmin)表达，共聚焦免疫荧光显微镜观察GFP+干细胞，分析干细胞定植及平滑肌和横纹肌分化。通过基因阵列分析、实时PCR等细胞学、分子生物学等技术，探索温和灸不同治疗时间括约肌组织趋化因子SDF-1（CXCR4）和MCP-3 （CCR1/CCR2）表达，从中医"络脉虚瘀"的角度探讨其归巢机制

目的：在应用间充质质干细胞治疗括约肌损伤及温和灸对创面修复研究的基础上，通过温和灸联合间充质干细胞移植探索温和灸不同治疗疗程括约肌组织趋化因子SDF-1和MCP-3的表达，从中医“络脉虚瘀”的角度探讨温和灸影响间充质干细胞归巢机制。方法：通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞，进行形态学观察，运用阴性选择的方法鉴定并备用。将SD大鼠分为手术组、假手术组、空白对照组组三大组，手术组建立Zutshi大鼠肛门括约肌损伤动物模型，假手术组仅切开大鼠肛门后位皮肤长3mm左右。每一大组分成温和灸组、干细胞静脉移植组、温和灸联合干细胞静脉移植组和生理盐水组。温和灸时间统一为30分钟，将疗程分为24小时、3天、7天、14天。治疗后取括约肌组织，运用Real-time PCR的方法检测括约肌组织趋化因子SDF-1和MCP-3的表达。结果：每个样品的定量进行三次重复，结果以2^（-∆∆Ct）显示。经统计学分析，空白对照组、假手术组、手术组各组之间进行T检验，得出各组之间所得值均具有统计学意义（p＜0.05）。根据得出的2^（-∆∆Ct）绘制柱状图，主要根据柱状图的趋势进行讨论。从趋势图来看，括约肌组织SDF-1与MCP-3趋势相近， SDF-1与MCP-3表达均呈现手术组＞假手术组＞空白对照组；温和灸联合干细胞移植组＞干细胞移植组＞温和灸组＞生理盐水组，且治疗后14天的＞7天的＞24小时的大于3天的。大致可以说明温和灸联合干细胞移植确实能够增加肛门括约肌损伤部位的SDF-1与MCP-3的表达。结论：在前期关于SDF-1与MCP-3和间充质干细胞归巢具有相关性的研究的基础上，我们初步可以证实温和灸对间充质干细胞的归巢有影响，且能够增强其归巢。最后，我们从中医“络脉虚瘀”的角度大胆假设并探讨了温和灸影响间充质干细胞归巢机制，并期望今后能向临床发展。