从雌激素受体与肾精亏损的相关性探讨六味地黄方抗更年期AS的作用机理

更年期雌激素水平降低，ER表达异常及其DNA甲基化，是更年期AS发生的病理基础。雌激素替代疗法的不确定性和明显的不良反应，为中医药防治该病提供了契机。雌激素水平下降，ER表达异常与肾精亏损密切相关，因此本项目选用补肾滋阴的代表方六味地黄方进行抗更年期AS的作用研究。建立在"六味地黄方干预更年期AS血管重构可能是通过调控雌激素及其受体水平实现的"假说之上。在模拟与人类更年期AS－肾精亏虚，浊瘀阻络病证相合的去势AS大鼠模型及细胞损伤模型上，研究六味地黄方以及各配伍对雌激素及其受体表达水平的调控，利用siRNA、q- PCR、Western bloting等技术，通过ER介导的ERK1/2信号通路探讨其作用机理。利用酵母双杂交试验和核内受体辅酶检测法寻找六味地黄方调控雌激素受体的相关成分。结果将为六味地黄方替代雌激素用于更年期心血管疾病的预防提供科学依据，为补肾滋阴理论提供科学的诠释。

更年期E2水平降低，ER表达异常，是AS发生的病理基础。E2替代疗法的不确定性和明显的不良反应，为中医药防治该病提供了契机。E2水平下降，ER表达异常与肾精亏损密切相关。因此课题利用雌性大鼠去卵巢加高脂饲料复制更年期AS模型，观察了六味地黄方（LWDHF）的作用及可能的机理。结果表明LWDHF可改善更年期AS大鼠脂质代谢紊乱、调节抗氧化能力、减少炎症反应，抑制血小板聚集，降低血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平，降低外周血中CEC数量和动脉硬化指数、升高血清NO、NOS水平、调节性腺轴相对平衡，上调E2和ER蛋白表达，抑制AS的形成。在H2O2致血管内皮细胞损伤和AngⅡ诱导平滑肌细胞（VSMCs）增殖模型上观察到LWDHF有抑制内皮细胞凋亡，阻止VSMCs向增生表型转化，抑制VSMCs的增殖和迁移等作用，当用ER受体阻断剂Tamoxifen和转染ERαsiRNA后这种作用消失，说明LWDHF抑制内皮细胞凋亡，调节VSMCs表型转换的作用依赖于ER，进一步证实其抗更年期AS的作用与ER相关，同时也证实了ERK1/2信号通路是LWDHF保护内皮细胞的途径之一。LWDHF可降低更年期AS模型大鼠血清中同型半胱氨酸（Hcy）含量，抑制模型大鼠主动脉甲基转移酶（DNMTs ）的蛋白表达。在Hcy损伤内皮细胞和诱导VSMCs增殖模型上发现，LWDHF可通过调节DNMTs表达，上调ER水平，发挥抗内皮细胞损伤，抑制VSMCs增殖的作用。证实该方还可能通过调节DNMTs，减少ER基因的甲基化，来阻止更年期AS的形成。拆方研究结果表明三个药对均可以使更年期AS模型大鼠血管病变减轻，其中改善血脂紊乱、降低外周血中CEC数量、升高血清NO、NOS水平、上调ERα、ERβ表达、调节性腺轴相关作用以滋补肾阴的熟地/泽泻药对作用最好。调节氧化系统的平衡、降低AngⅡ水平、抑制炎症因子的作用养肝的山茱萸/丹皮作用最好，调节6-k-PGF1α/ TXB2的平衡补脾的山药/茯苓较好。调节GER30表达以山茱萸/丹皮效果为好、熟地/泽泻次之，山药/茯苓无影响。因此肾精亏损与雌激素及其受体水平下降密切相关，是更年期大鼠AS模型血管重构的病理基础，而上调E2、ER水平是滋补肾阴的LWDHF干预更年期AS血管重构的重要途径。因此LWDHF替代E2用于更年期心血管疾病的预防有着良好的前景。