PRDX2作为分子伴随物在结直肠癌发展、转移中的作用

结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，过氧化氧化还原蛋白2（PRDX2）通过其过氧化物酶等功能或以分子伴随物的形式在肿瘤细胞对抗ROS、细胞增殖、分化等过程中发挥了重要作用。本项目在初步证实PRDX2参与结直肠癌进展，并与c-Myc基因关系密切的基础上，拟通过对PRDX2和c-Myc在结直肠癌组织中的共表达情况、内源性及外源性PRDX2蛋白和c-Myc蛋白的相互作用、PRDX2和c-Myc之间相互作用的具体位点、PRDX2和c-Myc相互作用后对结直肠癌细胞生物学特征的影响等四部分的研究，以期阐明PRDX2作为分子伴随物与c-Myc发生相互作用，并对结直肠癌发展、转移产生影响这一科学问题，也可能为结直肠癌的防治研究提供新的靶点和切入点。

结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，全球新发病例和致死率均逐年增长。过氧化氧化还原蛋白(peroxiredoxins, PRDX）是重要的抗氧化酶,在肿瘤对抗 ROS 的过程中发挥了极为重要的作用，与肿瘤关系密切。前期工作中采用免疫共沉淀方法对可能与 PRDX2 发生作用的蛋白质进行分析鉴定，发现其中的9种蛋白受c-Myc基因的调控。PRDX2 与 c-Myc 基因相互作用对结直肠癌细胞产生的影响是本课题主要问题。采用qRT-PCR技术,免疫组化及 Western blot 技术,发现PRDX2、c-Myc表达均表现为癌组织阳性率高于癌旁及正常组织，二者的表达有显著相关性。PRDX2、c-Myc 表达与结肠癌的TNM分期及淋巴结转移有关；我们采用免疫共沉淀方法证实了结肠癌细胞内内源性PRDX2 蛋白与c-Myc蛋白的相互作用；我们采用免疫共沉淀的方法证实了正常结肠粘膜细胞外源性的PRDX2 蛋白与c-Myc蛋白在体内环境中也存在相互作用。构建 PRDX2 过表达、野生型 c-Myc过表达、清除 c-Myc 同形异构体Ⅱ的过表达与 PRDX2 过表达与野生型 c-Myc过表达共转染、PRDX2 过表达与清除 c-Myc 同形异构体Ⅱ的过表达载体转染正常结肠粘膜细胞株，采用免疫共沉淀的方法进行检测，实验结果显示PRDX2与 c-Myc 的作用位点可能在同形异构体Ⅱ(MBⅡ)；以结肠癌细胞为研究对象,构建PRDX2及 c-Myc过表达或干扰慢病毒载体，对结直肠细胞生物学特征的影响进行研究。实验结果显示，PRDX2可能通过调控c-Myc对细胞的生物学行为发挥影响。PRDX2沉默可促进细胞凋亡而抑制细胞增殖， PRDX2过表达细胞凋亡减少而促进增殖， c-Myc沉默可促进细胞凋亡，抑制细胞增殖；PRDX2沉默能减弱细胞侵袭和迁移能力，PRDX2过表达细胞迁移和侵袭均增加，而c-Myc沉默能减弱细胞迁移和侵袭能力；PRDX2沉默后结肠癌细胞内的ROS含量明显升高；构建皮下移植瘤模型，PRDX2沉默后结肠癌裸鼠移植瘤生长较对照组减慢；检测PRDX2沉默后Wnt/β-catenin通路相关基因的蛋白表达显示PRDX2沉默后下游靶基因c-Myc和Survivin的蛋白表达下降。PRDX2对结肠癌的生物学功能行为有重要影响，可作为干预肿瘤的潜在靶点。