丙型肝炎病毒膜融合触发机制的研究

丙型肝炎病毒（HCV）与主要受体间的相互作用是病毒入侵的首要步骤，而病毒又是通过膜融合将自身的基因组运送至靶细胞中，最终导致病毒感染，目前，关于其膜融合的触发机制尚不明确，但已有的研究发现，同其他黄病毒类似，HCV膜融合也需要早期内体中的低pH的触发，但需不需要受体的相互作用还为未可知。本课题拟利用具感染性的HCVcc，先建立一低pH依赖的HCV膜融合系统，然后设计并筛选出受体SR-BI和CLDN1特异的siRNAs，将最有效siRNA构建成慢病毒表达质粒，经细胞感染进一步验证干扰效果后，通过不同组合，建立受体被稳定干扰的细胞株，最后，借助上述膜融合系统，检测受体干扰与否对低pH依赖的HCV膜融合活性的影响，综合分析并理清病毒与受体的相互作用和低pH与HCV膜融合间的关系。此外，本项目建立的融合感染系统还可用于HCV小分子融合抑制剂的研制与筛查方面的研究。

丙型肝炎病毒（HCV）与主要受体间的相互作用是病毒入侵的首要步骤，而病毒又是通过膜融合将自身的基因组运送至靶细胞中，最终导致病毒感染，目前，关于HCV膜融合的触发机制尚不明确，但已有的研究发现，同其他黄病毒类似，HCV膜融合也需要早期内体中的低pH的触发，但需不需要受体的相互作用还未为可知。本课题利用具感染性的HCVcc，先优化建立了低pH依赖的HCV融合感染系统，在此基础上，分析了一系列影响HCV融合感染系统的微环境因素，该部分研究结果已撰写论文（待投稿）；同时，设计并筛选出受体SR-BI和CLDN1特异的siRNAs，并获得了SR-BI-shRNA慢病毒表达质粒，细胞感染实验验证其干扰效果；最后，筛选并鉴定出了HCV包膜蛋白E2上数个关键且保守的氨基酸残基与病毒的再感染性密切相关，推测影响的可能是病毒入侵或膜融合过程，尤其是组氨酸，很可能与低pH诱导的融合蛋白构象改变有关。部分研究结果已发表（1篇SCI论文和1篇中文论文）。此外，本项目建立的融合感染系统还可用于HCV小分子融合抑制剂的研制与筛查方面的研究。