硫酸盐还原菌的磁性荧光量子点定量检测及磁性分离技术研究

油田生产中硫酸盐还原菌(SRB)检测周期长精度低，目前基于纯培养技术、DNA水平、蛋白水平的定量检测仍存在不足，不能有效地指导生产实践。SRB菌分离纯化周期长且操作繁琐，目标菌株难以分离等实际问题。通过学科交叉将医学领域量子点技术引入到环境微生物检测和分离研究。研究将磁性荧光量子点与SRB菌特异性的抗体结合制备新型检测探针，实现SRB菌快速定量检测和分离。主要研究通过SRB菌腺苷酸还原酶（APS）和亚硫酸盐还原酶（DSR）基因全序列的克隆和表达载体构建，表达蛋白纯化获得抗原；采用杂交瘤技术制备单克隆抗体及抗体蛋白纯化；新型的磁性和荧光双功能量子点的制备、磁性荧光量子点和抗体组装的表征及机理研究；建立SRB菌定量检测方法；磁性分离技术结合改良的厌氧培养技术，建立SRB菌快速分离纯化富集方法。该研究对厌氧生物反应器和环境样本中功能菌群的定量检测，厌氧菌的快速分离纯化提供了理论依据和技术支持。

针对油田硫酸盐还原菌检测周期长，检测精度较低的问题开展了硫酸盐还原菌定量检测研究。项目从硫酸盐还原菌检测的基础方法到量子点检测，开展了一系列的试验，开发出基于特定基因的MPN法对硫酸盐还原菌进行定量检测的方法，DSR-MPN-PCR法、APS-MPN-PCR法以及16S rDNA-MPN-PCR法对SRB的定量检测，检测周期需要3~4h，降低了检测费用，提高检测精度大约100倍。采用TaqMan-MGB、TaqMan-LNA型探针，建立新型硫酸盐还原菌DNA荧光定量PCR检测系统。 . 制备了磁性荧光量子点，并进行硫酸盐还原菌的检测。检测的结果表明量子点适合检测，样品浓度低，小于CFU/mL，室内可以实现检测，但是存在的问题是，厌氧条件控制难度较大，离现实的工业化应用还有一段距离，但是应用前景是光明的。 . 项目申请和授权专利5项，发表文章12篇，其中SCI 6 篇，EI 3 篇，利用该项目资助科学出版社出版专著1部。由于时间紧，部分成果还没有发表。