DOR-β-arrestin1-Bcl-2/NF-κB信号转导通路在溃疡性结肠炎的发病机制及其湿热证的实质研究

溃疡性结肠炎(UC) 是一种以肠道免疫功能紊乱为主的炎症性肠病，T细胞功能失调在UC的免疫病理中居于核心环节，而T细胞凋亡缺陷扮演着中心角色,抗凋亡蛋白Bcl-2的过度表达使T细胞的生存时间延长并持续活化，参与了UC发病,而DOR通过β-arrestin1影响CD4+T细胞的生存和凋亡,并与NF-κB共同调控淋巴细胞的凋亡，最终导致UC的发生。蛋白质飞行质谱（SELDI）能从整体水平上检测正常或某种疾病时特有蛋白质的表达，与中医辨证论治都是在整体水平上研究疾病，故利用SELDI开展与湿热证相关的蛋白质组学的研究。本课题通过采用免疫组化、EMSA、RT-PCR半定量等方法，研究UC的DOR-β-arrestin1-Bcl-2/NF-κB信号转导通路及其清热燥湿凉血法治疗作用，并通过研究湿热型UC差异蛋白质，绘制出蛋白质图谱，深入揭示UC的发病机制和湿热证的实质，为临床诊治UC提供理论依据。

目的：通过检测溃疡性结肠炎（UC）大鼠在复方苦参汤等多种药物治疗前后，DOR、β-arrestin1、Bcl-2的表达水平，研究UC 的发生机制和清热燥湿凉血法(复方苦参汤)治疗作用。方法 建立UC模型后，用复方苦参汤大、中、小剂量，美沙拉嗪等药物进行治疗后，取大鼠结肠和脾脏组织分别用RT-PCR、western blot和免疫组织化学法检测大鼠结肠和脾脏组织中DOR、β-arrestin1、Bcl-2的表达, 同时,通过双向聚丙烯凝胶电泳（2-D PAGE）及MALDI-TOF-MS质谱分析等生物信息学分析方法对UC患者结肠黏膜组织全蛋白进行比较蛋白质组学分析。结果 在模型组中 DOR、β-arrestin1、Bcl-2表达增加，经过药物治疗后，三者的表达显著降低。结论 DOR-β-arrestin1-Bcl-2/NF-κB信号转导通路在UC大鼠的发生过程中起一定的作用，而清热燥湿凉血法(复方苦参汤)可能是通过该信号转导通路的调节来达到治疗作用的。同时，通过双向聚丙烯凝胶电泳（2-D PAGE）及MALDI-TOF-MS质谱分析等进行比较蛋白质组学分析，选择其中20个有较大差异表达蛋白点（图3），通过质谱分析鉴发现4个UC湿热内蕴证表达上调的蛋白：结合珠蛋白（Haptoglobin）、血清淀粉蛋白P（Serum amyloid）、上皮细胞钙粘蛋白（Epithelial-cadherin）、触珠蛋白（Haptoglobin）；5个表达下调的蛋白：al-酸性糖蛋白（Orosomucoid）、免疫球蛋白κ链C区（Ig kappa chain C region）、玻连蛋白（Vitronectin）、前列腺素-H2D-异构酶（Prostaglandin-H2D-isomerase）、AMBP蛋白（AMBP protein）。这些蛋白可能成为分析中药有效治疗UC时的靶蛋白，以及UC湿热内蕴证的实质。