虎杖苷通过抑制内在凋亡信号改善烧伤后血管通透性增高

本课题拟在既往对虎杖苷治疗休克、改善微循环的研究基础上，通过观察线粒体介导的内在细胞凋亡信号活化途径，进一步研究其在烧伤后血管通透性改变中的作用与机理。复制烧伤动物模型，活体观察肠系膜微静脉通透性改变，以透射电镜观察内皮细胞超微结构，测定肠系膜组织中smac、细胞色素C含量及Caspase-3活性，免疫组化检测β-catenin表达；同步建立离体培养人微血管内皮细胞体系，使用人正常血清及烧伤血清刺激后，观察细胞单层通透性、smac、细胞色素C含量、Caspase-3活性、线粒体活性氧及膜电位等指标，进而明确内皮细胞线粒体活性氧可诱导内在细胞凋亡信号活化，最终引起烧伤后血管通透性增高。在实验模型中选用虎杖苷作为治疗药物，以线粒体保护剂环孢霉素A作为阳性对照，对虎杖苷的线粒体保护作用进行进一步探讨，观察虎杖苷在大面积烧伤早期治疗中的作用，寻求临床治疗烧伤后水肿的有效药物。

目的: 研究虎杖苷通过抑制线粒体内在凋亡途径对烧伤后局部及全身性血管通透性增高的改善作用。方法： 复制大鼠30%烧伤动物模型，随机分为虎杖苷（PD）、环孢霉素(CsA)或白藜芦醇(Res)及对照处理组，使用活体显微镜观察肠系膜微静脉的通透性。分离烧伤部位微血管，观察PD的局部保护作用。检测肠系膜血管组织脂质过氧化物(LPO)水平和细胞色素C、caspase-3、Bax、Bcl-2表达。免疫组化观察β-catenin分布。结果:PD可显著降低烧伤后局部血管通透性增高；对于全身性血管通透性增高，Res、PD均有效，PD更显著。PD可显著减少烧伤后细胞色素c和Smac释放,调节Bax、 Bcl-2表达，减少caspase-3的激活，使得β-catenin在肠系膜微静脉内重新分配。结论:PD通过抑制线粒体内在凋亡途径活化明显改善烧伤后局部及全身血管通透性增高。更多在细胞层面的研究仍在进行中,预期观察将在2015年底完成。