IL-6/STAT3调控胆管上皮细胞EMT在移植肝胆管纤维化中的作用及机制

非吻合性胆管狭窄严重影响肝移植(LTx)受者生存和生活质量，冷保存再灌注损伤（CPRI）所致的移植肝胆管纤维化是其病理基础，但发病机制有待进一步阐明。课题组前期发现LTx后胆管纤维化病变中存在胆管上皮细胞（BEC）上皮-间质转化（EMT）现象,结合文献及既往工作基础，我们推测：BEC通过EMT构成管周基质生成细胞的主要异质性来源，是移植肝胆管纤维化的重要机制，且IL-6/STAT3通过靶分子三叶因子3（TFF3）在BEC EMT中发挥关键作用。本项目拟在培养的BEC及大鼠LTx模型上，采用siRNA、激光共聚焦、EMSA、CHIP等方法观察CPRI后BEC形态改变，检测其上皮、间质性标志物及TFF3表达；并通过上调及抑制IL-6/STAT3/TFF3，研究其对BEC EMT的调控作用，阐明BEC EMT在胆管纤维化发生中的作用及机制，为LTx后非吻合性胆管狭窄的防治提供新策略。

非吻合性胆管狭窄严重影响肝移植受者(LTx)生存和生活质量，冷保存再灌注损伤（CPRI）所致的移植肝胆管纤维化是其病理基础，但发病机制有待进一步阐明。课题组前期发现LTx后胆管纤维化病变中存在胆管上皮细胞（BEC）上皮-间质转化（EMT）现象,结合文献及既往工作基础，我们推测：BEC通过EMT构成管周基质生成细胞的主要异质性来源，是移植肝胆管纤维化的重要机制，且IL-6/STAT3通过靶分子三叶因子3（TFF3）在BEC EMT中发挥关键作用。.基于此研究假设，本课题组采用实时荧光定量PCR（QRT-PCR）、蛋白质印迹分析（Western blotting）及免疫组织化学（Immunohistochemistry）等方法，在大鼠LTx模型上观察了CPRI后BEC的形态改变，并检测其上皮、间质性标志物及IL-6/STAT3/TFF3表达；体外模拟BEC CPRI过程，并通过构建质粒转染、外源性重组蛋白、siRNA、抗体封闭等方法分别上调及抑制IL-6/STAT3/TFF3信号通路各分子，检测其上皮、间质性标志物及TFF3表达，重点研究该信号通路对BEC EMT的调控作用，阐明了BEC EMT在CPRI后胆管纤维化发生中的作用及机制。.本研究成功构建了重建肝动脉血供的同系大鼠肝移植模型，并合成构建了携带TFF3基因的腺病毒载体，于体外成功模拟了肝移植的CPRI过程。体内及体外两部分实验结果证实了CPRI可通过激活IL6/STAT3/TFF3信号途径诱导BEC EMT，可能是移植肝胆管纤维化的重要发病机制，明确了TFF3在该过程中起关键调控作用。本研究结果为LTx后非吻合性胆管狭窄的防治提供了新的临床策略，并且为损伤性胆管狭窄、肝胆管结石等其他相关疾病的理论研究和临床诊治提供了新的线索。.基于本项目的研究结果目前已发表论著两篇，其中SCI论著1篇，国内核心期刊论著1篇，待发表论著2篇，相关实验结果正在整理统计。