RBM5及其融合基因调控凋亡相关基因组的表达及对肺癌耐药的实验研究

肺癌的化疗耐药是世界性的难题，凋亡失衡是引起肿瘤耐药的重要机制之一。我们目前的研究显示RNA结合基序蛋白5（RBM5）具有诱导凋亡、抑制肿瘤生长的作用；新发现的RBM6-RBM5融合基因在肿瘤细胞有特异性表达。为明确它们在调控肺癌细胞凋亡、化疗耐药方面作用机制的异同，本研究将在以下几方面进行探讨：1、比较耐药与非耐药人肺癌细胞中RBM5及其融合基因与凋亡家族基因组（TNF、IAP、Bcl-2、Fas、Caspase等）的表达情况；2、在它们超表达的人耐药肺癌细胞及裸鼠实体瘤模型中比较凋亡相关基因组表达的变化及耐药的逆转情况；3、应用shRNA封闭耐药肿瘤细胞中RBM5表达，观察其耐药性及凋亡基因组表达变化；4、明确新融合基因和RBM5调控凋亡逆转肿瘤耐药机制的异同。该研究将为多途径研究肿瘤发生机制、逆转耐药及基因靶向治疗提出新理念；为筛选、发现新的肿瘤耐药相关凋亡基因提供平台。

肺癌的化疗耐药是世界性的难题，凋亡失衡是引起肿瘤耐药的重要机制之一。RNA结合基序蛋白5（RNA binding motif 5, RBM5）是新近发现的凋亡调控基因，但在我们的研究之前，该基因是否参与及调控肺癌化疗耐药尚无报道。本研究中：①我们采用顺铂大剂量冲击与逐步增加剂量诱导的人肺腺癌耐药细胞A549/DDP与其亲代的A549细胞进行研究，首先明确了肺癌耐药形成的凋亡基因谱，确定了耐药与非耐药人肺癌组织和细胞凋亡相关基因组表达差异的比值，为筛选、发现新的肿瘤耐药/逆转耐药相关凋亡基因表达水平提供评价标准和平台。②本研究首次发现，具有诱导凋亡、抑制肿瘤生长作用的新基因RBM5在人肺腺癌耐药细胞（A549/DDP）中表达下调。③本研究首次在体内、体外证实，将含RBM5基因的质粒导入A549/DDP后，A549/DDP的RBM5表达水平明显增加，细胞凋亡率增加，对顺铂敏感性增加，顺铂诱导的凋亡发生率明显增加，凋亡基因组表达总体呈促凋亡效应；而应用siRNA封闭A549/DDP细胞细胞中RBM5表达，A549/DDP的RBM5表达水平明显增加，细胞凋亡率增加，对顺铂敏感性增加，顺铂诱导的凋亡发生率明显增加，凋亡基因组表达总体呈抗凋亡效应。本研究表明，凋亡调控新基因RBM5可能是肺腺癌促凋亡分子靶向药物的新分子靶点，并证明以此为靶点调控促凋亡的途径可有效逆转肺癌细胞耐药，为肿瘤耐药的基因靶向治疗提出了新的方法和思路。