基于P2Y6相关信号通路介导的内皮细胞炎症稳态失衡研究“虚、瘀、风”病机高血压病血管重塑的机制及中药干预

Vascular endothelial cells inflammatory reaction is an important cause of vascular remodeling in hypertension. P2Y6 receptor is widely distributed in the vascular endothelium as a proinflammatory factor.It may participate in the regulation of cardiovascular inflammatory while the mechanism is unclear. For thirteen years clinical and experimental study, We found that the TCM compound of nourishing yin and emolliating liver as well as transforming stasis and extinguishing wind can reduce the level of blood pressure and improve the clinical symptoms safely and efficiently,as well as decrease the blood pressrue of SHR rats significantly and reduce the vascular wall inflammation,improve the functions of vascular endothelial cells and reverse vascular remodeling.Based on the previous researches,through in vivo and in vitro experiments and comprehensive evaluation method of cell biology and molecular biology technology ,we try to verify the molecular mechanism of vascular remodeling caused by inflammatory homeostasis disruption mediated by P2Y6 related signaling pathways.Thus,to reveal the characteristics and regularity of hypertensive vascular remodeling from the aspect of macro-cell-molecular.Besides,Fufangqishao jiangya tablet of nourishing yin and emolliating liver as well as transforming stasis and extinguishing wind were applied as a counterevidence,to clarify and enrich the scientific meaning pathomechanism of "vacuity,stasis and wind",which provide new ideas and targets for hypertensive vascular remodeling prevention.

血管内皮细胞炎症反应是引起高血压病血管重塑的重要原因。嘌呤受体P2Y6作为主要的促炎因子，在血管内皮广泛分布，与高血压病血管炎症调控密切相关，但其机制未明。我们经过13年的临床和实验研究发现，针对高血压病"虚、瘀、风"的中医病机，采用养阴柔肝、化瘀息风的中药复方干预，能安全有效地降低患者的血压水平、改善临床症状；并能显著降低SHR大鼠血压，减轻血管壁炎症反应，改善血管内皮细胞功能，逆转血管重塑。因此，本项目拟在前期研究基础上，通过在体与体外实验，综合运用细胞生物学、分子生物学技术和功能评价方法，从整体-细胞-分子三水平，探明"P2Y6相关信号通路介导内皮细胞炎症稳态失衡，导致高血压病血管重塑"的分子机制，揭示高血压病血管重塑的特点与规律。并以养阴柔肝、化瘀息风治法的复方七芍降压片干预反证，以期阐明并丰富"虚、瘀、风"病机的科学内涵，为高血压病血管重塑的防治提供新的思路与靶点。

一、项目背景.高血压病是危害人类健康的“第一杀手”。血管重塑是高血压病发生的重要病理基础。内皮细胞炎症引起高血压血管重塑的重要机制，其发生发展的分子机制迄今尚未阐明。G蛋白偶联嘌呤受体P2Y6是机体的主要促炎因子之一。其参与调控血管内皮炎症反应，与调节血压密切相关。以内皮细胞炎症反应为切入点研究高血压病血管重塑的发生机制，具有十分重要的意义。.二、主要研究内容.本课题研究内容可分为在体实验与离体实验。在体实验通过运用无创血压、电镜和光镜技术、体视学、ELISA、免疫组化、qPCR、WB等技术，检测了SHR血压、炎症标志物：IL-6，IL-8，IL-10，IL-1β，TNF-α，血管结构组织形态，血管重塑标志物：MMP-2、MMP-9，TIMP-2、TIMP-9，P2Y6受体表达通路：P2Y6、Gq/11、MEK1/2、ERK1/2等相关指标。离体实验通过建立内皮细胞及平滑肌细胞共培养体系、RNA干扰技术建立P2Y6受体沉默内皮细胞模型，检测了内皮细胞形态，炎症因子：IL-6、IL-8，P2Y6，相关信号通路基因和蛋白：PLC、ERK1/2、I-κBα、NF-κB、P65.三、重要结果.复方七芍降压片可以有效干预SHR大鼠模型自发性高血压及内皮细胞炎症；P2Y6在调控炎症信号通路中起关键作用，复方七芍降压片通过抑制炎症反应而减少炎症因子对P2Y6的刺激进而减少P2Y6对炎症通路的促进，最终达到消炎与降压的目的；“虚、瘀、风”病机与高血压病的发生关系密切，该病机与血管炎症及重塑有关；在SCI期刊发表论文2篇，国家核心期刊上发表论文17篇，培养研究生14名。.四、关键数据.复方七芍降压片及厄贝沙坦片均能明显降低SHR血压，并够通过降低P2Y6受体的表达，抑制Gq/11-PLC-I-κB/NF-κB或MRK1/2-ERK1/2-AP-1-MCP-1通路，导致血管内皮细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-ɑ降低，IL-10上升，从而达到降低血管内皮炎症及血管重塑的目的。.五、科学意义.①本课题证明炎症是引起高血压病血管重塑发生发展的重要分子机制，其发生与P2Y6受体表达，并激活下游信号通路相关。②本课题证明传统中医药理论指导下，“虚、瘀、风”病机与高血压病的发生密切相关，以及中医药对高血压病血管炎症及重塑抑制的重要科学意义。