桃仁-红花药对调控髓核-软骨终板微环境延缓椎间盘退变的研究

Cervical spondylosis has become one of the major diseases that threatens the health of the adult population. Intervertebral disc degeneration is the main pathology of cervical spondylosis."QiXu and XueYu"is an important lesion basis for disc degeneration.The nucleus pulposus - the cartilage endplate border zone microenvironment directly affect the process of disc degeneration. Preliminary studies have shown that "siwutang" and "Taoren-Honghua drug pair" treatment of cervical disease have better clinical efficacy. "Taoren-Honghua drug pair" may inhibit the IVDD..This project on the basis of preliminary studies, the supply from the disc nutrition, metabolism and regulation of extracellular matrix, nucleus pulposus - endplate interface inflammation, and the regulation of chondrocytes degeneration and apoptosis, in-depth research study on how "Taoren-Honghua drug pair" works on regulate the IVD endplate blood supply, ECM metabolism and the fuction of IVD cells. Further more the mechanism of "Taoren-Honghua drug pair" delays disc degeneration by regulating the micro-environment beween nucleus and the cartilage end-plate will be revealed.

颈椎病(Cervical Spondylosis) 已经成为威胁成年人健康的主要疾病之一。椎间盘退变（intervertebral disc degeneration, IVDD）是颈椎病的主要病理基础，"气虚血瘀"是椎间盘退变的重要病变基础，髓核-软骨终板交界区微环境直接影响椎间盘退变的进程。研究证明四物汤和桃仁-红花药对治疗颈椎病有较好的临床疗效，桃仁-红花药对具有抑制IVDD的作用。.本项目在前期研究的基础上，从椎间盘营养供应、细胞外基质代谢及调节、髓核-终板交界面炎症反应、终板软骨细胞改变和凋亡的调控等方面，深入研究椎间盘微环境变化以及桃仁-红花药对对IVD终板血供、ECM代谢和IVD细胞功能的调控作用，探讨IVDD发生机制及其相互关系，阐明该药对对IVD髓核-软骨终板交界区微环境的调控机制，为其防治IVDD奠定基础。

项目背景：椎间盘退变是颈椎病最根本的病理基础。“气虚血瘀”是椎间盘退变的重要病变基础。本项目在前期研究的基础上，深入研究椎间盘微环境变化以及桃仁-红花药对对IVD终板血供、ECM代谢和IVD细胞功能的调控作用，阐明该药对对IVD髓核-软骨终板交界区微环境的调控机制。.研究内容：体内实验：从一月龄SD大鼠椎间盘中分离软骨终板并培养，经鉴定后，随机分组为正常组、诱导组、HSYA不同浓度给药组、苦杏仁苷不同浓度给药组、桃仁-红花含药血清组、HSYA联合苦杏仁苷组，Real-time PCR (RT-PCR)检测Col2α1、Aggrecan、Col10α1、ADAMTS-5、MMP-13、Sox9及炎症因子 IL-1β、IL-6 mRNA的表达情况，Western blot检测不同时间点IL-1β下游三个级联信号分子ERK1/2、JNK和P38-MAPK蛋白及磷酸化蛋白的表达情况。体外实验：Wistar大鼠随机分对照组、模型组、假手术组、莫比可组、桃仁-红花药对组，除对照组、假手术组外，其余组进行动静力失衡性大鼠椎间盘退变模型手术造模，术后12周，各给药组开始灌胃给药，其余组正常饲养，30d后处死，取颈椎。.重要结果：1.体外实验表明，HSYA、苦杏仁苷都能够调节大鼠椎间盘软骨终板细胞退变相关基因及蛋白的表达，能够促进椎间盘软骨细胞的增殖，抑制其凋亡，具有抑制IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞退变的作用。其机制可能是通过抑制ERK1/2蛋白磷酸化的过程实现的，且苦杏仁苷联合HSYA作用强于单独用药。桃仁-花药含药血清也可抑制IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞退变。2.体内实验表明，桃仁-红花药对可减轻椎间盘退变大鼠椎间盘高度的降低，抑制软骨终板及纤维环破坏，降低软骨基质丢失，抑制软骨终板细胞凋亡，延缓椎间盘退变。.科学意义：桃仁-红花药对及其单体可以通过维持软骨细胞基质代谢、促进软骨细胞增殖，抑制软骨细胞凋亡、衰老达到抑制椎间盘退变的作用。.项目资助发表SCI论文1篇，核心论文9篇。培养硕士生5名，其中4名已经取得硕士学位，1名在读。项目投入经费65万元，支出34.5896万元，各项支出基本与预算相符。剩余经费计划用于本项目研究后续支出。