内毒素对肺LIMR基因表达的影响及其意义的研究

急性肺损伤(ALI)是临床常见危重症。探讨内源性炎症负性调控机制对阐明ALI发生发展的病理生理过程、探索新的防治途径十分重要。子宫珠蛋白(UG)是在肺内高表达的内源性抗炎因子。申请者首次在内毒素(LPS)急性肺损伤小鼠肺组织检测到UG受体"lipocalin-1相互作用膜受体"(LIMR)表达上调，这也是目前肺内LIMR存在诱导性表达的唯一研究。本项目拟进一步揭示LPS急性肺损伤小鼠肺内LIMR表达变化的时空规律，用慢病毒介导RNAi敲减LIMR基因表达观察对LPS肺损伤的影响，探讨LIMR表达上调的病理生理意义，初步论证LIMR表达上调是肺内炎症负性调控机制的重要组成的科学假说；在体外观察LPS、IL-1beta、TNF-alpha对LIMR表达的影响，并通过萤光素酶报告基因、EMSA、ChIP等技术首次探讨LIMR基因转录调控的分子机制，为更深入研究LIMR基因调控和功能奠定基础。

Lipocalins是小分子可溶性分泌蛋白家族。目前已发现四种可以结合不同lipocalin的受体。Lipocalin-1相互作用膜受体（LIMR）最早发现可以特异性结合lcn-1，但研究发现它还可以结合pVEG, UG,BLG等多种配体，是一个多配体受体，因此在GenBank中LIMR有“蛋白质LMBR1L”、“子宫珠蛋白受体”等多种命名。本项目首次研究探讨其在急性肺损伤中的表达和作用。 查明了LIMR mRNA和蛋白在小鼠急性肺损伤过程中的动态变化及在肺内的分布。为研究LIMR的转录调控机制成功构建了含有LIMR启动子的萤光素酶报告基因质粒并确定核心启动子区。为探讨LIMR在肺损伤发生过程中的作用，用配体激活LIMR后发现可明显减轻肺损伤程度和肺内肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 和白细胞介素－1 β (IL-1β)等细胞因子水平。 用LIMR的配体作用于肺上皮细胞株可以导致细胞内 JNK，p38和ERK磷酸化水平改变，提示MAPK 信号通路可能参与介导LMBR1L激活后的胞内信号转导过程。计划外研究还发现，LIMR激活通过ERK通路抑制A549细胞上皮－间质转化，证明该信号通路的激活具有功能意义。上述研究有助于阐明LIMR在肺损伤发生发展中的作用，并为肺损伤防治提供新思路。