捻转血矛线虫重组galectin抑制山羊外周血淋巴细胞细胞因子转录的通路研究

捻转血矛线虫是重要消化道寄生线虫，也是寄生线虫的模式，对反刍动物危害极大。已经证明，该虫体的galectin是重要的免疫抑制分子，体外试验可以抑制山羊PBMCs有丝分裂原诱导的多种细胞因子mRNA的转录水平。本研究拟将捻转血矛线虫重组galectin Hco-gal-f和Hco-gal-m以及有丝分裂原Con A或LPS与山羊外周血淋巴细胞共同培养，鉴定淋巴细胞的galectin结合分子，观察细胞因子转录信号传导通路、调控通路以及有丝分裂原信号通路中多种关键分子的变化，并用RNAi技术和蛋白组学技术加以验证，研究galectin抑制有丝分裂原诱导的细胞因子转录的信号传导通路，对于阐明寄生性线虫galectin的生物学功能以及虫体所引起的免疫抑制机制具有重要意义，对于虫体的免疫防控以及促进我国养殖业的发展具有重要意义。

捻转血矛线虫是重要消化道寄生线虫，对反刍动物危害极大，同时，该虫也是寄生线虫的研究模式。前期的研究证明，虫体的galectin是重要的免疫抑制分子，可以抑制宿主山羊PMMC细胞因子的分泌，可以诱导细胞凋亡，但对其机制并不清楚。本项目使用酵母双杂交、免疫共沉淀、蛋白组分析、RNAi等技术证明TMEM147、TMEM63和 SERP1是山羊PBMC线虫galectin受体或伴侣蛋白。它们介导galectin对PBMC多种功能的影响，包括细胞因子分泌、增殖、游走、细胞凋亡、吞噬活性、一氧化氮产生等。证明PBMC不同亚类细胞对galectin刺激的反应能力不同，其中，galectin诱导的细胞凋亡主要发生于T细胞，而不是单核细胞。使用蛋白组学技术和生物信息学技术证明PBMC受到galectin刺激后，16种蛋白表达发生变化，差异蛋白分布于15种信号通路。利用实时定量PCR技术证明，galectin能够激活TLR 通路和 CASPASE通路，对于VEGF、自由基产生、T细胞发育和NFκB等信号通路则表现出抑制作用。蛋白组学技术和实时定量PCR技术研究证明，galectin对ConA 诱导PBMC活化的能力具有明显抑制作用，可以引起蛋白表达水平出现差异，细胞因子及其受体通路、 MAPK通路、Toll样受体通路、CDK通路、JAK/STAT通路和 SOCS/PIAS通路等均受到不同程度的影响。上述结果，首次阐明了捻转血矛线虫galectin抑制宿主PBMC功能的分子机制，填补了国内外研究空白，对于深入了解捻转血矛线虫等消化道线虫的免疫逃避机制以及线虫病的免疫预防具有重要理论意义。