按揉手法对家兔失神经支配骨骼肌卫星细胞Wnt/β-catenin通路调控的靶向效应研究

After peripheral nerve injury,skeletal muscle irreversible atrophy because of the loss of neurotrophic effect.Keepinp the regenerative activity of muscle satellite cell Is the key of denervated skeletal muscle function recovery effectively.The study found that the Wnt/β-catenin pathway in skeletal muscle denervation muscle atrophy play a very important role. To activate Wnt/β-catenin pathway can retard denervated muscle atrophy.But the clinical researches in this area have not been seen.Our previous studies have shown that manipulation therapy can retard denervated skeletal muscle atrophy by improving the microenvironment of denervated skeletal muscle and the activity of remaining nerve.The reason may be manipulation therapy could activate the Wnt/β-catenin pathway. but the specific mechanism of action was still unclear.So intend of this project was to establish varying degrees of denervated rabbit skeletal muscle model firstly. The expression of Axin and GSK-3 beta in skeletal muscle and the changes in the structure and activity of the motor endplate and the expression of the muscle satellite cells were observed.Then to study regulation of manipulation therapy on Wnt/β-catenin pathway,to observe the target and the way of manipulation therapy in delaying denervated skeletal muscle atrophy.

周围神经损伤后，骨骼肌因为失去神经营养作用而发生不可逆性损伤萎缩。保持失神经支配骨骼肌卫星细胞的再生活性，是失神经支配骨骼肌有效功能恢复的关键。研究发现，Wnt/β-catenin信号通路在骨骼肌损伤修复中起着非常重要的作用，激活Wnt/β-catenin信号通路传导可以促进失神经支配骨骼肌再生修复。我们前期研究显示：推拿通过改善失神经支配骨骼肌内的微环境以及骨骼肌内残存神经的活性和分泌能力，可以延缓失神经骨骼肌的萎缩，但这是否和推拿手法激活Wnt/β-catenin信号通路传导有关，具体的作用机理仍不甚清楚。因此本项目拟通过观察失神经支配后骨骼肌中Axin、GSK-3β的表达与运动终板结构与活性的变化、肌卫星细胞表达活性，阐明手法促进肌卫星细胞成肌分化的Wnt/β-catenin信号通路的调控作用，阐释推拿对失神经支配骨骼肌萎缩再生修复的作用靶点与途径。

周围神经损伤后，骨骼肌因为失去神经营养作用而发生不可逆性损伤萎缩。保持失神经支配骨骼肌卫星细胞的再生活性，是失神经支配骨骼肌有效功能恢复的关键。研究发现，Wnt/β-catenin信号通路在骨骼肌损伤修复中起着非常重要的作用，激活Wnt/β-catenin信号通路传导可以促进失神经支配骨骼肌再生修复。本项目通过观察失神经支配后骨骼肌中Axin、GSK-3β的表达与运动终板结构与活性的变化、肌卫星细胞表达活性等，阐明手法促进肌卫星细胞成肌分化的Wnt/β-catenin信号通路的调控作用，阐释推拿对失神经支配骨骼肌萎缩再生修复的作用靶点与途径。结果显示按揉手法可促进肌卫星细胞增殖分化，从而加快肌肉修复。按揉手法同时还可提高静止期肌卫星细胞稳态，维持静止期肌卫星细胞数量，从而保持肌卫星细胞再生潜能。手法组肌卫星细胞修复肌细胞能力更强，因此在失神经后单位面积肌核数得到较好维持，保持了肌细胞的蛋白代谢能力。同时也发现推拿手法上调了Wnt/β-catenin通路上游Wnt1、Wnt3、Wnt3a的基因表达，下调了通路负向调节因子Axin及GSK3β的表达，增加了β-catenin蛋白的累积，激活失神经肌萎缩家兔Wnt/β-catenin通路，同时降低了TGFβ1、TGFβ2、CTGF、Fn1、Collagen-1等纤维化指标的表达，抑制了通路激活可能带来的纤维化倾向。因此，推拿手法通过促进肌卫星细胞的增殖分化并促进肌卫星细胞迁入肌细胞补充肌核,从而提高其肌肉修复能力。