回阳生肌膏促进2型糖尿病溃疡微血管形成的作用机制研究

Diabetic ulcer has become the major cause of death and disability in patients with diabetes mellitus. Injury of vascular endothelial cells and neovascularization disturbance and oxidative stress injury is factors of diabetic foot refractory ulcerative microcirculation lesion. The research group used Huiyang Shengji ointment in the treatment of diabetic ulcers for 20 years, and achieved a good clinical efficacy. This topic to diabetic ulcers in patients with primary microvascular endothelial cells and diabetic ulcer rat model as the research object, clarify Huiyang born muscle cream before and after the treatment of ulcer of diabetic patients and diabetic ulcer rat target lesions angiogenesis, CD105, VEGF / VEGFR and other angiogenesis related cell factors and inflammatory factors, and the level of serum vascular generation related cytokine intervention mechanism; of Huiyang Shengji ointment main component of in vitro diabetic ulcer wound primary micro vascular endothelial cell proliferation, migration and microtubule cavity formation and blood vessels in the Pi3k/akt generation signaling pathway, reveal its action mechanism to promote angiogenesis. To verify and enrich "suppuration to flesh" and "back to yang to muscle" theory: "simmer septic" to suppress the inflammatory reaction, improve hypoxia, alleviate the oxidative stress injury; "Huiyang" to promote angiogenesis and ameliorate the tiny blood vessels, accelerate ulcer healing.

糖尿病性溃疡已成为糖尿病患者致残和死亡的主要原因。血管内皮细胞损伤、新生血管形成障碍，氧化应激损伤等是糖尿病足难愈性溃疡局部微循环病变的因素。课题组应用回阳生肌膏治疗糖尿病性溃疡20余年，取得了良好的临床疗效。本课题以糖尿病溃疡患者原代微血管内皮细胞及糖尿病溃疡大鼠模型为研究对象，阐明回阳生肌膏治疗前后对糖尿病溃疡患者及大鼠靶皮损血管新生，CD105、VEGF/VEGFR等血管生成相关细胞因子和炎症因子，以及血清血管生成相关细胞因子的干预机制；探讨回阳生肌膏主要成分对体外糖尿病溃疡创面原代微血管内皮细胞增殖、迁移、微管腔形成及Pi3k/akt血管生成信号转导通路的影响，揭示其促进血管新生的作用机制。验证并丰富“煨脓以长肉”、“回阳以生肌”理论：“煨脓”以抑制炎症反应，改善乏氧状态、缓解氧化应激损伤；“回阳”以促进血管新生、改善微血管状态，加快溃疡愈合。

糖尿病足溃疡是糖尿病并发症中发病率极高的的一类疾病，若不加以治疗，容易出现坏疽，糖尿病足引起的高截肢率和死亡率是糖尿病足患者最为重视的问题。国内外的专家一直专注于如何延缓或控制糖尿病足溃疡的加重，中医药的迅猛发展给医药研究者治疗糖尿病足溃疡提供了新思路。回阳生肌法为首都医科大学附属北京中医医院国家名老中医赵炳南、王玉章创立的，回阳生肌膏是回阳生肌法的代表性外用药物，具有温阳益气、活血生肌的功效，临床用于慢性皮肤溃疡阴证疮面的预后疗效显著，但对治疗糖尿病足阴证溃疡的研究较少，经过长期临床观察分析发现回阳生肌膏对糖尿病足溃疡阴证疮面的效果比较突出。前期已有临床病例和基础动物实验证实了回阳生肌膏可以促进慢性疮面炎症反应，促进血管新生，提高免疫力等，需要进一步以临床病例、基础动物、细胞为研究对象从组织、蛋白，分子和基因层面深入的研究回阳生肌膏对糖尿病创面微血管新生的作用机制。在经历三年的摸索从临床到基础，基于PI3K/AKT通路探讨回阳生肌膏对糖尿病大鼠创面微血管生成作用机制进行了深入的研究。通过HE染色、愈合率的分析、创面色泽形态学的改变证明回阳生肌膏可以有效的促进糖尿病创面的愈合，可能是基于PI3K/AKT通路来实现的，通过Elisa、Western Bloting、qPCR、Transwell、细胞划痕及成小管实验手段表明回阳生肌膏可以促进新生血管相关因子的生成，并可以激活内皮祖细胞诱导其产生大量的内皮细胞促进微血管的新生，除此之外，回阳生肌膏可以促进糖尿病创面氧化应激反应，促进糖尿病创面炎症因子及生长因子的生成。此次研究为回阳生肌膏“回阳生肌、煨脓长肉”提供了科学的理论依据和数据支撑：温阳益气活血促进局部血管新生，修复血管内皮细胞，改善局部微循环，回阳益气，以改善乏氧状态，缓解氧化应激损伤，祛邪以祛腐新生，促进新生肉芽组织的生长，促进创面的愈合。