大肠杆菌内修饰胸腺素α1的N-末端乙酰转移酶的鉴定及功能研究

胸腺素α1（Tα1）是重要的抗病毒、肿瘤治疗药物，是一个具有N-末端乙酰化修饰的28肽。乙酰化修饰对其体内稳定性具有重要作用。目前主要采用化学合成方法制备Tα1。为了利用基因工程手段制备Tα1，我们将Tα1的C端与不同的载体蛋白融合，在大肠杆菌内表达融合蛋白，经表达、分离纯化及质谱鉴定，发现有部分融合蛋白存在乙酰化修饰，而且该修饰位于Tα1的N-Ser残基上，并通过基因敲除筛选实验找到了可能参与Tα1乙酰化修饰的酶。本课题拟通过基因补救、体外修饰、质谱分析技术等手段，进一步确证大肠杆菌内修饰Tα1的N-末端乙酰转移酶；应用双向电泳技术寻找酶的体内底物，了解其生理功能；克隆表达纯化该酶并进行底物特性研究；研究该酶表达水平与Tα1在大肠杆菌内乙酰化修饰程度之间的关系，为采用基因工程技术制备具有N-末端乙酰化修饰的Tα1和其它乙酰化修饰的重要多肽提供理论依据。