基于诱导和增强黏膜免疫效应的B群流脑疫苗实验研究

脑膜炎球菌A、B、C、Y及W-135血清群是侵袭性脑膜炎最常见的病因，目前已有针对A、C、Y及W-135群的流脑疫苗，尚无针对B群流脑的疫苗，致使B群流脑暴发与流行的可能性增大，迫切需要发展有效的疫苗进行预防。近年来发现的奈瑟菌表面蛋白A（NspA），抗原性高度保守，被认为是B群流脑疫苗潜在的候选抗原；其主要不足是诱导黏膜免疫效果差和免疫原性较弱。大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)是一种粘膜佐剂和黏膜载体分子，可能具有增强NspA免疫原性和促进黏膜免疫应答的双重功能。本研究拟通过基因克隆技术构建nspA-ltB融合基因的真核和原核重组质粒，以纳米铝递送疫苗，采取核酸初免－蛋白加强的免疫策略，鼻饲免疫小鼠，期望表达的LTB- NspA融合蛋白的免疫效果优于单基因非融合蛋白，黏膜佐剂LTB能诱导和增强小鼠的粘膜保护性免疫，为研制人用高效抗B群流脑疫苗奠定基础。

脑膜炎球菌A、B、C、Y及W-135血清群是侵袭性脑膜炎最常见的病因，目前已有针对A、C、Y及W-135群的流脑疫苗，尚无针对B群流脑的疫苗，致使B群流脑暴发与流行的可能性增大，迫切需要发展有效的疫苗进行预防。本课题研究了两种B群流脑疫苗候选抗原，一种是奈瑟菌表面蛋白A（Neisseria surface protein A，NspA），另一种是B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315（Neisseria meningitides serogroup B0315, NMB0315）。成功构建了NspA蛋白疫苗和核酸疫苗，通过肌肉注射、腹腔注射和鼻饲途径免疫雌性BALB/c 小鼠，诱导产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答以及黏膜免疫应答；NspA蛋白疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1:64；72小时内对实验小鼠的免疫保护率为85%，NspA蛋白疫苗的免疫效果优于核酸疫苗。成功构建了黏膜佐剂ltB与NspA基因融合原核表达重组体pGEX-6P-1/ltB-nspA，rLTB-NspA蛋白疫苗诱导产生的特异性IgG和黏膜SIgA水平明显高于rNspA蛋白疫苗组，72小时内对实验小鼠的免疫保护率为90%，说明黏膜佐剂LTB可有效辅佐疫苗蛋白NspA产生体液免疫应答，尤其是黏膜免疫应答。成功构建了NMB0315蛋白疫苗和核酸疫苗，诱导实验小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答以及黏膜免疫应答；NMB0315蛋白疫苗和核酸疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价均为1:128；72小时内对实验小鼠的免疫保护率分别为90%和70%。上述研究结果表明，NspA和NMB0315具有作为预防B群流脑疫苗候选抗原的能力，黏膜佐剂LTB与疫苗抗原偶联，可增强其免疫原性并可有效辅佐疫苗抗原产生黏膜免疫应答。