血管内皮生长因子（VEGF）对青光眼术后伤口愈合与滤过泡瘢痕形成的调节作用及机理研究

目前临床上青光眼术后滤过区瘢痕化的防治不甚理想，寻找到抗瘢痕形成过程中的关键靶点是抑制瘢痕化的根本要素。新近研究报道及课题组前期工作证实：在青光眼滤过系统中高表达的VEGF直接促进人Tenon's囊成纤维细胞（HTF）增殖，导致滤过区瘢痕化。本课题拟利用微球流式、免疫细胞化学及激酶活性测定等手段，通过临床患者标本的对比检测、细胞信号通路实验及动物实验，达到：1.探明在瘢痕化与非瘢痕化患者滤过系统中VEGF及其受体的表达差异，以验证VEGF在瘢痕形成中扮演主导角色的假说；2.揭示VEGF活化下游靶细胞进而促细胞增殖和迁移的信号通路，阐明VEGF在瘢痕形成过程中的作用机制；3.阻断动物模型中VEGF通路，观察青光眼术后滤过泡情况，分析滤过区血管密度、胶原沉积和炎性反应变化，从而揭示VEGF水平与青光眼滤过术后瘢痕形成的关系，以VEGF作为新靶点，探索简便易行、安全有效的防止瘢痕化的新策略。

本课题的研究目的：1.探明在瘢痕化患者滤过系统中VEGF及其受体的表达情况，验证VEGF在瘢痕形成中扮演主导角色的假说；2.揭示VEGF活化下游靶细胞进而促细胞增殖和迁移的信号通路，阐明VEGF在瘢痕形成过程中的作用机制；3.阻断动物模型中VEGF通路，观察青光眼术后滤过泡情况，分析滤过区血管密度、胶原沉积和炎性反应变化，从而揭示VEGF水平与青光眼滤过术后瘢痕形成的关系，以VEGF作为新靶点，探索简便易行、安全有效的防止瘢痕化的新策略。研究方法：通过收集临床上发生术后瘢痕化的青光眼患者组织标本进行原代人Tenon囊成纤维细胞（HTF）培养，应用real-time RT-PCR以及western blot方法检测VEGF以及其受体的表达情况；通过构建VEGF特异性短发夹环RNA（shRNAs）阻断VEGF的表达，以及应用ERK1/2阻断剂从而抑制HTF的增殖；通过建立兔眼青光眼模型以及动物眼组织给药，观察抗VEGF防止瘢痕发生的临床表现和相应指标。研究结果：我们成功地原代培养了青光眼滤过手术失败后形成滤过区瘢痕化的患者HTF，并进行生长特性的研究和对比。在RNA和蛋白水平上分别检测到了HTF细胞中VEGF/VEGFRs的表达。随后我们通过VEGF-shRNA有效地阻断了VEGF在HTF中的表达，ERK1/2的阻断剂与抗VEGF的作用一致，显著抑制HTF的细胞增值率。在动物实验中，我们成功地制备了兔眼的青光眼滤过手术模型；并且将抗VEGF组与对照组进行对比研究以及临床指标的观测，在控制眼压以及维持滤过泡存在率上抗VEGF均可安全有效地防止术后瘢痕化的发生。研究结论：在青光眼术后瘢痕化患者的滤过系统中VEGF通过其受体以及ERK1/2通路发挥重要作用，抗VEGF可有望成为临床上控制青光眼术后滤过区瘢痕化的安全有效手段。