景颇族传统昆虫药物胡蜂蜂毒对大鼠MCAO/R后BBB的保护作用及其潜在机制探索

Cerebral ischemia reperfusion injury (CIRI) is an important cause of ischemic cerebrovascular disease. In the process of cerebral ischemia reperfusion injury, the free radicals and nitric oxide (NO) increase, energy metabolism, toxicity of excitatory amino acids, inflammatory factors attack, aquaporin 4 (AQP-4) overexpression and blood brain barrier structure protein claudin-5 deficiency, leading to blood brain barrier (BBB) damage, BBB permeability increase, the degree of brain edema aggravating, which trigger a series of pathophysiological changes during ischemia, and seriously affect the treatment effect of drugs. Previous studies have shown that vespid venom can improve the neurological score and reduce the cerebral infarction area of MCAO/R rats. However, it has not been involved in the study of the pathophysiological changes of cerebral ischemia. According to the efficacy of Wasp, we surmise that the main characteristics of the bee needle to cure hemiplegia patients are “anti-inflammatory, edema elimination, and BBB protection”. This study build a pathological model of cerebral ischemia / reperfusion injury (MCAO/R) in rats by suture method, researching whether the wasp venom with obvious protection on cerebral ischemic injury in the early stage of the experiment relates to the protection of BBB, and to explore its possible mechanism.

脑缺血再灌注损伤（CIRI）是导致缺血性脑血管病恶化的重要原因。在脑缺血再灌注的过程中，由于自由基和一氧化氮（NO）剧增、能量代谢异常、兴奋性氨基酸毒性、炎症因子攻击、水通道蛋白4（AQP-4）过度表达、血脑屏障结构蛋白Claudin-5等缺失，导致血脑屏障（BBB）的破坏，使BBB通透性增加，加重脑水肿的程度，引发一系列缺血后期的病理生理改变，严重影响药物治疗效果。前期研究表明胡蜂蜂毒可改善MCAO/R大鼠神经病学评分、减轻脑梗死面积。但其作用于脑缺血后病理生理改变的哪一个环节，至今未涉及相关的研究。根据胡蜂的功效，我们大胆推测蜂针能治愈偏瘫患者的主要特色是“抗炎、消水肿、保护BBB”。因此本研究采用大鼠MCAO/R模型及细胞共培养技术，研究在前期实验中对脑缺血性损伤具有明显保护胡蜂毒素，是否与保护BBB有关？并探讨其可能的作用机制。

急性缺血性脑卒中(AIS)是致残和死亡的主要原因之一，严重危害人类健康。AIS涉及多种类型的细胞应激，在缺血过程中触发一系列病理生理变化，严重影响药物治疗效果。虽然对黄蜂毒液的成分和作用方式的认识可以追溯到50年前，但这些毒素的治疗价值仍然相对空白。黄蜂毒液来源于自大黄蜂Vespa magnifica(Smith)。黄蜂毒液用于治疗主要的神经系统疾病，包括癫痫、帕金森病和阿尔茨海默病。然而，尚未有研究报道黄蜂毒液对中风的影响。因此，本研究旨在探讨蜂毒对大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)脑卒中的影响及其机制。本次研究内容及结果如下：（1）研制了一种涂膜剂，以避免黄蜂毒液引起的不良反应；（2）用MCAO诱导雄性SD大鼠实验性缺血性脑卒中，蜂毒蜂毒作为药物治疗，通过Longa试验、Rotarod试验和Grip试验评估神经元损伤。用梗死体积、HE染色、水肿程度等指标检测脑损伤。采用末端脱氧核苷酸转移(TUNEL)和免疫组化染色检测细胞凋亡，ELISA试剂盒检测全身细胞因子反应及血浆和脑内炎症变化。蜂毒经皮给药对脑缺血脑卒中具有神经保护作用，包括加速皮质血流恢复、改善神经损伤、减少脑梗死体积和血脑屏障通透性。随后，我们假设黄蜂毒液影响脑卒中病理过程的某一部分。我们发现黄蜂毒液可通过抑制能量耗竭、氧化应激、神经炎症、谷氨酸兴奋毒性和细胞凋亡等途径改善中风后神经功能缺损。此外，蜂毒对大鼠大脑中动脉阻断(MCAO) 72h后脑组织的神经新生和血管新生因子具有调节作用。（3）用HPLC分离得到留个主要成分，通过ESI-MS 和MALDI-TOF-MS 等现代质谱技术以及NMR的氢谱、碳谱和二维核磁共振信息结合多肽蛋白的N端测序技术和质谱C端测序技术和相关数据库检索，最终确定所分离得到的6个主要成分的氨基酸序列。（4）发现胡蜂毒中防治脑缺血再灌注的主要成分是C成分。