HLA-G5表达对人羊膜间充质干细胞诱导免疫耐受的影响和机制研究

Mesenchymal stem cells not only posses multi-lineage differentiation potential and immunomodulatory properties but also induce tolerance.The research that MSCs affect immune tolerance and the mechanism, in clarifying the immune properties and regulatory mechanism of MSCs,for therapy of immunological diseases, is of great significance.Human amnion-drived mesenchymal stem cells with rich source，no invasive,not involved ethical trouble,is superior to traditional source of MSCs.T cell proliferation, activation and T helper cell differentiation;B cell cycle and apoptosis; NK cell migration and function;and DC maturation in vitro with hAD-MSCs co-culture experiments ，and grafting hAD-MSCs to the acute liver injury mice and allogeneic skin transplanted mice in vivo experiments, are designed to observe the immune tolerance effect and the mechanism induced by hAD-MSCs,in which HLA-G5 upregulation through IL-10 or gene transfer and downregulation by antibody blocking or gene silencing. Thus to seek more ideal cell source for cell replacement or regenerative medicine and also to provide new ideas for novel drugs of inducing tolerance.

间充质干细胞不仅有多系分化潜能，还具免疫调节作用,可诱导免疫耐受。MSCs与免疫耐受效应及其机制的研究，在阐明MSCs的免疫特性和调控机制以及重大免疫性疾病的临床治疗方面，具有重大意义。人羊膜间充质干细胞来源丰富，无侵入性，不涉及伦理，具有优于传统来源MSCs的优势。本研究旨在通过对T细胞增殖、活化和T辅助细胞分化，B细胞周期和凋亡，NK细胞迁移和分泌功能及DC成熟体外共培养实验，和对急性肝损伤小鼠模型和同种异体皮肤移植小鼠模型进行移植的体内实验，观察hAD-MSCs诱导的免疫耐受效应；并通过IL-10和基因转染上调，抗体阻断和基因沉默下调HLA-G5表达，研究HLA-G5对hAD-MSCs诱导免疫耐受的影响和可能机制。为细胞替代和再生医学寻找更理想的细胞源，也为诱导免疫耐受新药的研发提供新的思路。

间充质干细胞优于胚胎干细胞和iPS细胞的主要原因就在于其安全性，没有免疫原性，不引起宿主免疫排斥。而羊膜间充质干细胞优于骨髓、脐血和脂肪等来源的间充质干细胞主要在于其无侵入性，伦理少，还有扩增性强等优势。我们发现：1.hAD-MSCs在体外可以抑制异基因淋巴细胞增殖，下调CD3+中CD4+和CD8+T细胞亚群，下调Th1细胞即CD4+IFN-γ+，并扩增CD4+CD25+FoxP3+亚群，这一作用可能与其分泌HLA-G5有关。2.通过自主构建HLA-G5慢病毒过表达载体，并成功感染hAD-MSCs，得到安全高效的感染效率，且在感染后hAD-MSCs上清液中检测到高水平HLA-G5表达。为后续体内外深入研究hAD-MSCs诱导免疫耐受的机制，或将HLA-G5修饰的hAD-MSCs直接移植治疗免疫性疾病模型，或者将hAD-MSCs作为生产HLA-G5的细胞反应器等工作，打下了坚实的基础。3.人羊膜间充质干细胞对完全免疫能力的百草枯中毒大鼠，具有急救能力，并能阻碍由百草枯导致的肺损伤和肺纤维化进程，人羊膜间充质干细胞不仅免疫原性低，而且在大鼠体内植活后仍然分泌HLA-G5，发挥其免疫抑制作用，对减缓大鼠肺部微环境的炎症具有重要作用。