视黄酸诱导蛋白6（Stra6）在小鼠胚胎着床和蜕膜化过程中的作用研究

STRA6 (gene stimulated by retinoic acid 6) is a multitransmembrane domain protein, as a key membrane receptor in the process of Vitamin A uptake. To date, the function of Stra6 in the uterus during implantation are still unknown. Stra6 mRNA is significantly upregulated on implantation site in day 4.5 mouse uterus and the Stra6 mRNA mainly express on the primer decidualization in day 4.5 uterus by in situ hybridization. Moreover, the conditional uterine stromal cell STRA6 gene deletion mouse can not implantation or delayed implantation.It is suggested that Stra6 should have the important function during implantation.The aim of this project is to examine the uterine expression and regulation of Stra6 during pregnancy in mice and its regulation using the animal model in vivo and in vitro. Meanwhile, we will study the function of STRA6 during mouse different pregnancy stages for example, implantation and decidualization using the conditional uterine stromal cell STRA6 gene deletion mouse. Moreover, We will identify molecules and proteins that can directly interact with STRA6 and downstream signaling pathways affected by STRA6 deletion in mouse uterus using the Co-IP and Microarry assay and we will also learn the effect on transport of Vitamin A.Our study will not only provide valuable information for understanding the molecular mechanism of STRA6 in keeping normal function of uterus, but also provide new idea for embryo implantation research and clinical infertility treatment.

STRA6是维生素A摄取和代谢的关键受体。迄今为止，STRA6在胚胎着床过程中的作用还不清楚。我们的初步结果表明，与非着床位点相比，Stra6 mRNA 在小鼠妊娠第4.5天子宫着床位点显著上调，Stra6 mRNA主要表达在围绕胚胎的初级蜕膜区。Stra6子宫基质细胞基因敲除小鼠不能或者延迟着床。本课题利用多种体内、体外动物模型研究STRA6在小鼠子宫中的表达和调节规律,构建STRA6基因子宫基质细胞特异性敲除小鼠研究STRA6在早期妊娠尤其是着床和蜕膜化过程中的作用。同时利用体内和体外模型，以及先进的分子生物学技术基因芯片和免疫共沉淀（Co-IP）等方法进行其相互反应基因和蛋白，以及上、下游信号通路的研究,另外我们将阐明对小鼠着床过程中维生素A摄取和代谢的影响。本研究将为阐明STRA6维持子宫正常生理功能的分子机理提供重要依据，为胚胎着床研究和临床不孕不育治疗提供理论基础。

成功的胚胎着床需要有活性的胚泡和呈现接受态的子宫同步发育，迄今为止，还有大量的关于胚胎着床的机制需要研究。维生素A及其衍生物在许多生物过程中是必不可少的。Stra6是一种多跨膜结构域蛋白，是细胞摄取维生素过程中的关键膜受体。Stra6在妊娠期过程中子宫内的功能尚不清楚。本项目首先通过原位杂交、RT-PCR、Western blot以及免疫荧光检测Stra6 mRNA和蛋白在小鼠早期妊娠模型、假孕、类固醇激素治疗和人工蜕膜模型中的表达。并且利用子宫基质细胞进行体外表达和功能更研究。我们发现Stra6 mRNA在妊娠第4天11:00h表达显著升高，主要表达在初期蜕膜区。并且我们精确地确定了Stra6 mRNA在着床过程中启动表达的时间，Stra6 mRNA在妊娠第4天6:00h开始表达在初期蜕膜区。并且我们在人工蜕膜化模型也得到了类似的的结果。另外我们用Lpar3-/-延迟着床小鼠模型发现着床延迟Stra6 mRNA在初级蜕膜区的表达也随之延迟。表明Stra6在胚胎着床启动的过程中应该具有重要的作用。我们同时构建了Stra6小鼠子宫基质细胞条件敲除小鼠模型（Stra6d/d）并检测小鼠Stra6d/d的生殖表型发现，与Stra6f/f小鼠相比，Stra6d/d小鼠在妊娠第4天11:00h着床位点数明显降低，随着妊娠的进行随后的第5.5、6.5、7.5时的着床位点数和窝产仔数没有显著差异，说明Stra6主要在小鼠启动着床的蜕膜化过程中起作用，具体机制还有待研究。下一步我们将进行用体内和体外模型研究Stra6导致小鼠延迟着床的分子机制，除了利用Stra6f/f小鼠模型，由于stra6主要表达在初级蜕膜区，我们同时利用Stra6 siRNA敲低子宫基质体外蜕膜化模型研究其在蜕膜化过程中的作用和分子机制，结果表明，Stra6 siRNA敲低子宫基质体外蜕膜化细胞中的表达能够抑制体外蜕膜化，并且能够抑制蜕膜化标志性分子Dtprp mRNA的表达，进一步证明其在小鼠蜕膜化过程中的作用，并且为研究Stra6在蜕膜化过程中的分子机制提供体外模型。