NADPH氧化酶信号网络：熊果酸选择性诱导活化型肝星状细胞凋亡的作用靶点？

肝纤维化及肝硬化是慢性病毒性肝炎、脂肪肝发病和死亡主要原因，迫切需研究出阻止或逆转肝纤维化的药物。活化的肝星状细胞（HSC）是肝纤维化的主要细胞，它的凋亡是肝纤维化的逆转程序。NAPDH 氧化酶（NOX）调控纤维化信号网络，在肝纤维化发病中起关键作用，是抗肝纤维化的重要新靶点。注意到NOX激活产生活性氧促进HSC增殖，却诱导肝细胞凋亡。我们前期研究发现，熊果酸选择性诱导活化型HSC凋亡，同时不引起肝细胞凋亡，体内有显著抗肝纤维化作用。熊果酸是否通过抑制NOX及信号网络来诱导活化型HSC凋亡，同时保护肝细胞？探索发现熊果酸对活化型HSC的NOX表达有影响，值得深入研究。本课题将在大鼠活化型HSC、静止型HSC及肝细胞上，分别观察熊果酸对NOX及其调控的信号网络的影响，探讨其选择性诱导活化型HSC凋亡的作用靶点，以进一步阐明熊果酸的抗肝纤维化分子机制，为其应用于肝纤维化治疗提供实验和理论依据。

肝纤维化是各种病因所致慢性肝损伤的创伤愈合反应，持续的炎症与纤维化最终导致肝硬化。肝星状细胞（HSC)的激活、转化被认为是肝纤维化发病的中心事件。近年研究发现NAPDH 氧化酶（NOX）信号在肝纤维化发病中起重要作用。研究以NOX为作用靶点，低毒、有效的抗肝纤维化药物有望为肝纤维化的治疗带来突破。本团队前期研究发现熊果酸（UA）具有独特的抗肝纤维化作用：在体外能选择性诱导活化型大鼠HSC-T6细胞凋亡、抑制其增殖，但促进肝细胞增殖；在大鼠体内实验发现熊果酸能阻断氧化应激和脂质过氧化、抑制HSC 的激活、减轻肝细胞坏死和纤维组织增生。基于文献报道熊果酸能下调人内皮细胞NOX4表达并抑制ROS产生，我们探索发现熊果酸对活化型HSC 的NOX表达有影响，本项目即是在此基础上的深入研究。本项目的主要研究内容有：1、以大鼠活化型HSC-T6细胞株为研究对象，观察熊果酸对NOX各个亚基mRNA和蛋白表达、亚基蛋白磷酸化、膜移位的影响；研究活化型HSC在不同促肝纤维化因子作用下，熊果酸对NOX调控的信号网络的影响及相关靶基因的变化，以阐明熊果酸选择性诱导HSC凋亡及抗肝纤维化的机制；2、从SD大鼠分离原代HSC细胞：观察原代（静止型）HSC向活化型HSC/MFB转化过程中，熊果酸干预对NOX的表达及Hh信号通路的影响，以探讨熊果酸对静止型HSC激活、转化、存活的影响及机制。研究结果发现：1)熊果酸能抑制瘦素、AngⅡ和PDGF诱导的HSC-T6 细胞NOX 亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1的mRNA与蛋白表达，阻止NOX 亚基p47phox膜移位，下调NOX活性，减少ROS生成；2)熊果酸能阻断促肝纤维化因子诱导的PI3K、Akt、ERK1/2、P38MAPK信号通路活化，抑制HSC-T6 增殖，促其凋亡，减少Ⅰ型胶原生成。3)熊果酸能抑制TGF-β诱导的原代HSC活化过程中NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1的mRNA和蛋白表达，抑制α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白合成。上述结果基本证实了本项目的假说：即NOX及其调控的信号网络可能是熊果酸选择性诱导活化型HSC凋亡、抑制其增殖的作用靶点。