TLR2/4-MyD88-NF-κB信号通路关键分子在小鼠体表感染软组织中的级联响应及三黄膏的干预效应

Based on pathological mechanism of SSTI because of inflammatory mediators generated and cascade amplification and clinical message of heat-clearing and detoxifying is to disappear swollen sores, meanwhile combined with Sanhuang plaster＇s previous work foundation, this research establishes a working hypothesis of cascade response of TLR2/4-MyD88-NF-κB inflammatory signaling pathways in mice＇s skin soft infectious tissue and possible mechanism of Sanhuang plaster＇s interfering effects. It adopts subcutaneous soft tissue infection model in mice,which was guided by staphylococcus aureus, and dynamically observes gene protein and phosphorylation level of TLR2/4-MyD88-NF-κB pathway key molecule TLR2/4, MyD88, IRAK1/4, TRAF6, TAB/TAK, IKK, NF-κB and cascade response of downstream inflammatory cytokinesIL-1β, IL-6, IL-8, IL-12, MIP-1α, MIP-1βand RANTES in infectious soft tissue. At the same time, after intervened by the preparation on the basis of examining Sanhuang plaster pharmacodynamics,through the correlation nanlysis,we will intend to use TLR2/4-MyD88-NF-κB signaling pathway to discuss mechanism of action and scientific connotation of Sanhuang plaster with heat-clearing and detoxifying effect treating subcutaneous soft tissue infectious disease,providing theoretical basis for clinical application in this preparation.

本研究基于体表软组织感染因炎性介质生成并级联放大的病理机制和中医“清热解毒以消肿疡”临床要旨，结合三黄膏前期工作基础，建立“TLR2/4-MyD88-NF-κB炎性信号通路在小鼠体表软组织感染中的级联响应及三黄膏干预效应的可能机制”工作假说，采用金黄色葡萄球菌诱导小鼠皮下软组织感染模型，并动态观察感染软组织中TLR2/4-MyD88-NF-κB通路关键分子TLR2/4、MyD88、IRAK1/4、TRAF6、TAB/TAK、IKK、NF-κB基因、蛋白表达水平及下游炎性分子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12，MIP-1α、MIP-1β、RANTES的级联响应；同时在考察三黄膏药效学基础上并应用该制剂干预后，通过相关性分析，拟从TLR2/4-MyD88-NF-κB通路探讨具有清热解毒作用的三黄膏治疗皮下软组织感染疾病的作用机制和科学内涵，为该制剂临床应用提供理论依据。

体表软组织感染可发生于临床内、外科许多疾病合并感染病程中，是由于病原体入侵与繁殖所引起的炎症反应，为临床常见病和多发病。金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus, SA)为最常见致病菌；其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA)为临床最常见耐药菌，对多种临床一线抗生素耐药，其致病力强、治疗难、病死率高，已成全球健康威胁。临床应用及课题组前期研究表明三黄膏对体表软组织感染具有良好的治疗效果，因此，本项目在前期基础上采用皮下注射金黄色葡萄球菌耐药菌（MRSA）建立大鼠皮肤软组织感染模型，从临床表现、病理和组织相关炎性因子改变研究三黄膏外用对感染大鼠炎症的干预作用。结果表明三黄膏能明显改善模型大鼠活动及进食状况，减轻创面损害及组织病理损伤，抑制大鼠感染组织中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、MIP-1α、MIP-1β、TNF-α水平，下调IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、MIP-1α、MIP-1β、TNF-α、 mRNA表达，对皮肤软组织MRSA感染表现出良好治疗作用；另外基于TLR2/4-MyD88-NF-κB信号通路探讨了三黄膏在调控皮肤软组织感染MRSA过程中的作用机制，表明三黄膏可下调TLR2/4、MyD88、IRAK、TRAF6、TAB1/2、TAK1、IKK、NF-κB P65 mRNA表达，降低TLR2/4、MyD88、IRAK、TRAF6、TAB1/2、TAK1、IKK、NF-κB P65蛋白含量，揭示三黄膏可能通过TLR2/4-MyD88-NF-κB信号通路抑制大鼠皮肤软组织感染MRSA的炎症反应。本研究基本明确了三黄膏对皮肤软组织感染MRSA的治疗效果及相关调控信号通路，为课题组进一步通过组学等技术从 “系统、整体”角度揭示三黄膏通过“多因、多效、多靶点”治疗本病的作用机制提供了研究依据和方向，为该外用制剂进一步临床应用和剂型改进、新药研发提供基础。