间充质干细胞联合胰岛移植调节T细胞滤泡辅助细胞对Ⅰ型糖尿病的实验性治疗研究

Ⅰ型糖尿病是糖尿病所有类型中最为严重的一种器官特异性自身免疫疾病，患者体内自身抗体的异常分泌可导致胰岛β细胞严重损坏，并诱发多种并发症，严重影响人们的健康。最新研究表明，间充质干细胞（MSCs）与胰岛细胞联合移植可通过诱导免疫耐受从而有效避免胰岛细胞单独移植引起的多种并发症，成为目前Ⅰ型糖尿病治愈的最佳方案，但MSCs的作用机制并不完全清楚。我们的前期研究首次表明，T细胞滤泡辅助细胞（Tfh细胞）与Ⅰ型糖尿病的发生密切相关，并很可能参与了移植后受者免疫体内免疫环境紊乱的持续存在。因此我们认为，MSCs与胰岛细胞联合移植不仅降低/抑制免疫排斥的发生，同时可能抑制了Th0向Tfh细胞方向的分化，改善胰岛β细胞抗原特异B淋巴细胞的功能，阻遏自身抗体的分泌，从根本上改善移植后受者体内免疫环境，实现胰腺组织的修复及功能的恢复，为MSCs联合胰岛细胞移植治疗Ⅰ型糖尿病的新方案奠定核心而可靠的理论基础

胰岛移植治疗糖尿病的过程中，胰岛移植物功能的逐渐丧失导致治疗失败，而糖尿病自身抗体的分泌则是破坏胰岛移植物功能最主要的原因，Tfh可以与B细胞相互作用促进B细胞分泌自身抗体，参与多种自身免疫性疾病的发生发展，而MSC联合胰岛移植可以延长受体正常血糖时间，因此我们假设，MSC对胰岛移植物的保护作用是否是通过调节Tfh细胞水平而实现的，其作用机制与Notch1信号通路有关。我们通过体内外实验证明，MSC对胰岛移植过程中胰岛移植物功能具有明显的保护作用，其作用机制为，MSC对Tfh细胞的分化具有调控作用，可以通过抑制CD4+T细胞向Tfh细胞分化，从而减弱Tfh细胞辅助的B细胞产生糖尿病自身抗体GAD65AB及IAA，进而减轻体内免疫细胞对胰岛移植物的排斥作用，从而保护胰岛移植物功能，在此基础上，我们进一步研究讨论了MSC调节Tfh细胞分化的作用机制，实验中我们发现，MSC表面高表达Notch1信号通路配体Jagged-1，MSC与CD4+T细胞共培养后，CD4+T细胞Notch1信号通路被激活，Notch1下游蛋白NICD，HES1，HEY1表达水平升高，FBW7表达下降,CXCR5表达水平降低，CD4+T细胞向Tfh细胞分化水平降低，然而在共培养体系中加入Notch1信号通路阻断剂后，Notch1信号通路下游蛋白NICD，HES1，HEY1表达水平降低，而FBW7表达水平增加，MSC抑制CD4+T细胞向Tfh细胞分化的作用明显减弱，在体内实验中也证实加入阻断剂后胰岛移植物生存时间较未加入组降低。因此综合以上结果考虑，MSC通过Notch1信号通路调节CD4+T细胞向Tfh细胞分化过程，从而降低糖尿病自身抗体GAD65AB及IAA水平，进而达到保护胰岛移植物功能的目的。