RNA介导的病毒抗性中的位置效应研究

本研究拟以马铃薯Y病毒（PVY）为实验材料，首先，采用RT-PCR技术，克隆PVY基因组RNA的12基因区段（包括5'和3'端非编码区）的cDNA，构建hpRNA结构的植物表达载体，转化烟草，进行抗病性鉴定，分析各区段介导的病毒抗性效果。然后，选择2～3个抗病效果好的基因区段，进行亚克隆，获得长度50bp的cDNA片段，构建hpRNA结构的植物表达载体，转化烟草，进行抗病性鉴定，分析各基因区段中不同位置序列对RNA介导的病毒抗性的影响，寻找能够引发RNA介导病毒抗性产生的最佳的靶序列，同时对不同效率的靶序列进行序列及结构分析，探讨"位置效应"产生的原因。进而，选取2～3个最佳靶序列，利用PCR技术，对不同位点的1～2碱基进行突变，同样构建载体，进行转化研究，比较突变和非突变序列介导的抗性的差异，探讨靶序列中不同位点对RNA介导的病毒抗性产生的影响。