EGFR激活在Meprin调控巨噬细胞活性氧生成的作用及机制研究

巨噬细胞生成活性氧是动脉粥样硬化（As）发生的重要机制。我们前期工作发现Meprin调控活性氧生成并参与As进程，其机制尚未阐明。研究发现表皮生长因子受体（EGFR）激活与活性氧生成有关，且发现Meprin在上皮细胞中激活EGFR，其机制需要深入研究。本项目推断巨噬细胞Meprin可活化EGFR配体，进而激活EGFR及下游信号调控活性氧生成。本项目拟建立As动物模型，观察Meprin调控活性氧生成的作用及对As进程的影响；培养腹腔巨噬细胞，研究Meprin激活EGFR机制，进而探讨EGFR及下游信号通路在Meprin调控活性氧生成中的作用，阐明EGFR及其信号通路中各个分子相互关系。本项目在前期研究的工作基础上，探讨Meprin调控活性氧生成的作用及EGFR激活在其中的作用机制，可明确Meprin与As发生的关系，加深对氧化应激致As作用机制理解，为临床防治As提供新的药物靶点。

巨噬细胞生成活性氧是动脉粥样硬化发生的重要机制。项目负责人前期工作发现Meprin 调控活性氧生成并参与AS 进程，并推测Meprin介导活性氧生成与表皮生长因子受体（EGFR）激活有关。本项目采用免疫组化、激光共聚焦、分子生物学、病毒克隆和SiRNA干扰等手段和在体、离体和细胞水平的ApoE小鼠高脂饮食致主动脉动脉粥样硬化形成的模型，首次发现：（1）证明了Meprin蛋白α亚单位促进动脉粥样硬化形成的作用，Meprin-α过表达慢病毒在体内促进粥样斑块形成、血管壁原味活性氧生成、EGFR蛋白激活；（2）Meprin-α在巨噬细胞中，介导氧化低密度脂蛋白（OxLDL）促活性氧生成的作用，并在巨噬细胞介导EGFR磷酸化激活、炎症因子生成；（3）首次揭示了Meprin-α通过促进EGFR配体HB-EGF生成进而激活EGFR及其下游的PI3K-Rac1-P38信号通路从而介导氧化应激、动脉粥样硬化形成的作用；（4）Meprin-α干扰慢病毒抑制小鼠主动脉粥样斑块形成和血管活性氧生成，进一步佐证了Meprin-α介导动脉粥样硬化形成的作用；（5）Meprin-α过表达慢病毒促进血管外膜滋养血管网扩张，介导血管外膜组织细胞产生活性氧，其机制同样与EGFR激活有关；（6）通过临床研究，初步证实了Meprin-α对冠心病诊断具有中等预测价值；Meprin-α联合臂踝脉搏波传导速度对2型糖尿病患者合并冠心病诊断具有更高的预测价值。上述结果从体内、体外及临床研究各个方面证实Meprin-α诱导血管动脉粥样硬化发生，其机制与Meprin-α介导细胞内EGFR及其下游细胞通路激活，产生活性氧、炎症介质有关。