CCL19/CCL17协同增强口腔黏膜免疫及分子机制研究

本课题组前期在国家自然科学基金项目的资助下，通过基因芯片和定量PCR技术筛选出两种重要的参与调控DNA疫苗免疫应答的趋化因子CCL19和CCL17，结合近期国外关于CCL19和CCL17的研究新发现，我们认为CCL19/CCL17作为一种新的联合佐剂策略应用于DNA疫苗黏膜免疫，很有可能发挥以增强抗体反应为主的免疫调控作用。据此，本项目拟构建小鼠CCL19和CCL17真核表达质粒，体外检测质粒表达的重组蛋白分别对树突状细胞（DCs）和Th2细胞的趋化能力；将两种趋化因子质粒与防龋DNA疫苗经黏膜途径共免疫动物，检测共免疫策略对疫苗的抗体水平、免疫反应类型及免疫保护效力的影响；分离免疫局部引流淋巴结，检测共免疫策略对淋巴结中两种趋化因子的表达水平的影响，对DCs和Th2细胞数量的影响，以及对不同Th型细胞因子分泌水平的影响，探讨CCL19/CCL17作为联合佐剂调控黏膜免疫反应的机制。

趋化因子作为一种新型的分子佐剂正在被广泛研究。本课题组在前期研究中发现趋化因子CCL19和CCL17参与了DNA疫苗的免疫调控过程，本项目中我们将CCL19和CCL17作为分子佐剂，单独或联合应用于防龋DNA疫苗免疫，探索CCL19、CCL17质粒DNA对防龋DNA疫苗免疫效果的影响和调控机制，以及CCL19/CCL17联合佐剂策略的可能性。研究结果显示pCCL19/GFP能够提高防龋DNA疫苗诱导的小鼠血清抗PAc IgG水平，并且诱导防龋DNA疫苗免疫反应倾向于Th1型。pCCL19/GFP免疫增强作用的机制可能是pCCL19/GFP免疫后可在次级淋巴组织中存在和表达，次级淋巴组织中CCL19的表达升高则趋化了更多的成熟树突状细胞（DCs）到该部位。pCCL17/GFP与防龋DNA疫苗共免疫小鼠，更快诱导了更为强烈的系统抗体反应。并且CCL17能够促进成熟DCs向次级淋巴组织迁移。但pCCL17/GFP没有明显改变免疫反应的Th类型。pCCL19/VAX、pCCL17/VAX单独或联合与防龋DNA疫苗经鼻腔滴注共免疫小鼠，可引起唾液和血清特异性抗体水平明显升高。pCCL19/VAX和pCCL17/VAX联合免疫的抗体水平高于pCCL19/VAX、pCCL17/VAX单独免疫。pCCL19/VAX、pCCL17/VAX单独或联合与防龋DNA疫苗共免疫定菌鼠，可明显减少大鼠口腔中变形链球菌的数量，引起唾液和血清特异性抗体水平升高，并明显减少龋齿发生率，而pCCL19/VAX、pCCL17/VAX联合免疫优于单独免疫。pCCL19/VAX、pCCL17/VAX联合免疫协同促进了成熟DCs向二级淋巴组织的趋化迁移。本项目为深入研究趋化因子佐剂之间的联合使用及机制探索提供了新的思路。