桃叶珊瑚苷对多巴胺能神经元保护作用及机制研究

In recent years, inflammation has been suggested to be involved in the occurrence and development of Parkinson by activation of microglia and overexpression of the inflammatory factors. Anti-inflammatory drugs have been developed to delay or prevented the progressive course of Parkinson, become a new hotspot in treatment of Parkinson. Aucubin is a herbal extract iridoid monoterpene derivative. The researches indicated that aucubin can inhibit NF-κB inflammation signal pathway, and the anti-inflammatory of aucubin will notice by researchers. Aucubin maybe have some effect on Parkinson and this regeneration may be aucubigenin combine with the NF-κB, inhibit NF-κB activity, deregulation the expression of inflammatory mediators, reduce ROS accumulation, and reduce damage of dopaminergic neurons. Base on this, we used the MPTP model in the C57BL/6 mouse and the IFN-γ/LPS induced BV-2 cell model as research object, further explore the protective effect and mechanism of aucubin. Through examine NF-κB activity, the levels of inflammatory mediators expression, the accumulation of ROS, the morphology dopaminergic neurons, the levels of Bcl-2/Bax protein expression, confirm that aucubin can inhibit NF-κB activity. To elucidate the molecular protective mechanism of aucubin on dopaminergic neurons, this provide new research results and a new strategy for the prevention and treatment of Parkinson.

小胶质细胞的激活以及炎性因子的高表达参与帕金森病的发生、发展过程，炎症反应在帕金森病中的作用引起人们广泛关注，利用抗炎药物治疗帕金森病成为研究热点。桃叶珊瑚苷是一种中药提取、小分子环烯醚萜类化合物，研究证实桃叶珊瑚苷能够抑制NF-κB炎症信号通路活性，其抗炎效应得到各国学者青睐。申请者认为桃叶珊瑚苷可能对帕金森具有一定的疗效，其可能作用机制为桃叶珊瑚苷在体内水解成苷元与NF-κB结合，抑制NF-κB活性，下调炎症因子表达，降低ROS积聚，进而减弱多巴胺神经元损伤。本研究拟以帕金森小鼠模型和体外小胶质细胞炎症模型为研究对象，深入探讨桃叶珊瑚苷神经保护作用及分子机制。通过检测NF-κB活性，炎症因子表达水平，ROS积累量，多巴胺神经元形态变化，凋亡通路蛋白表达水平，证实桃叶珊瑚苷能够抑制NF-κB活性达到治疗目的。阐明桃叶珊瑚苷保护神经元细胞分子机制，为帕金森的防治提供全新研究结果和新策略。

小胶质细胞的激活以及炎性因子的高表达参与帕金森病的发生、发展过程，炎症反应在帕金森病中的作用引起人们广泛关注，利用抗炎药物治疗帕金森病成为研究热点。桃叶珊瑚苷是一种中药提取、小分子环烯醚萜类化合物，研究证实桃叶珊瑚苷能够抑制NF-κB炎症信号通路活性，其抗炎效应得到各国学者青睐。本项目旨在探讨桃叶珊瑚苷在帕金森模型和LPS/IFN-γ诱导BV2细胞炎症模型中的作用机制研究。.（1）制备MPTP亚急性PD模型。用神经毒素MPTP对C57BL/6小鼠进行PD模型制备，同时分别用不同剂量桃叶珊瑚苷进行治疗。在造模后第1、3、5、7、14天进行行为学实验，检测运动协调能力。结果显示，桃叶珊瑚苷可以在一定程度上提高PD小鼠的运动协调能力，并且呈剂量依赖。.（2）桃叶珊瑚苷对PD小鼠的神经保护作用。通过对中脑苏木素-依红染色及免疫组织化学染色发现，桃叶珊瑚苷可以通过抑制中脑的炎性细胞、以及增加内酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase, TH）阳性细胞，从而起到神经保护作用。并且，通过检测发现，桃叶珊瑚苷可以提高PD小鼠脑黑质（Substantia nigra, SN）及纹状体中TH的表达。.（3）桃叶珊瑚苷对PD小鼠神经保护作用机制研究。通过Western blot检测NF-kB通路相关蛋白磷酸化水平的变化，并用分子对接的方法进行对接。结果显示，桃叶珊瑚苷可以特异性抑制NF-kB通路相关蛋白的活化，并且确定桃叶珊瑚苷与NF-kB的作用位点为P65的Ser276。.（4）通过体外实验发现，桃叶珊瑚苷能够有效抑制炎症引起的炎症因子（TNF-α，IL-1β，IL-6）的释放，并且这种治疗作用具有剂量依赖性；.总之，本研究明确了桃叶珊瑚苷对MPTP诱导的PD小鼠的神经保护作用，并通过体内、外实验初步阐明了其作用机制是通过炎症机制来完成的，为桃叶珊瑚苷治疗炎症疾病提供治疗策略。