野生型RASSF1A基因经caspase-3通路促进丝裂霉素诱导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

我们研究发现：丝裂霉素（MMC）诱导肝细胞肝癌（HCC）细胞QGY-7703凋亡时，野生型RASSF1A基因的重表达可通过激活caspase-3促进肝癌细胞发生凋亡。因此，我们将利用已建立的稳定表达RASSF1A基因的HCC细胞株QGY-7703和BEL-7402，分别抑制经caspase-3的三条经典凋亡通路，分析三条凋亡通路中相关基因在MMC作用肝癌细胞前后的表达水平变化，确定野生型RASSF1A基因经caspase-3通路促进MMC诱导肝癌细胞凋亡的靶基因；制备羧甲基壳聚糖-半乳糖-Fe304磁性复合纳米粒子，包裹RASSF1A质粒，使RASSF1A基因在裸鼠原位移植HCC模型中高效靶向表达，同时裸鼠腹腔注射MMC，验证体外实验结果。这将进一步阐明野生型RASSF1A基因参与细胞凋亡调控的分子机制，也为通过重表达野生型RASSF1A基因以提高HCC对MMC的化疗敏感性提供了理论依据。

我们已进行的研究发现：丝裂霉素（MMC）诱导肝细胞肝癌（HCC）细胞QGY-7703凋亡时，野生型RASSF1A基因的重表达可通过激活caspase-3促进肝癌细胞发生凋亡。因此，我们利用已建立的稳定表达RASSF1A基因的HCC细胞株，分别抑制经caspase-3的三条经典凋亡通路，分析三条凋亡通路中相关基因在MMC作用肝癌细胞前后的表达水平变化。研究结果发现： RASSF1A基因经caspase-8和caspase-9通路促进MMC诱导肝癌细胞凋亡；我们成功制备了羧甲基壳聚糖-半乳糖-Fe3O4磁性复合纳米粒子（Gal-CMCS-Fe3O4NP），Gal-CMCS-Fe3O4NP可用作质粒DNA或反义寡核苷酸的载体，应用于体内和体外转染，不仅安全有效，而且具有磁场和肝脏双重靶向性。Gal-CMCS-Fe3O4NP介导RASSF1A在裸鼠肝癌组织重表达可提高MMC诱导的肝癌细胞生长抑制率、凋亡发生率和caspase-3的活性。本课题研究结果说明Gal-CMCS-Fe3O4NP作为一种新型高效的非病毒载体用于肝癌的基因治疗是可行的，并进一步阐明了野生型RASSF1A基因参与细胞凋亡调控的分子机制，也为通过重表达野生型RASSF1A基因以提高HCC对MMC的化疗敏感性提供了理论依据。