NQO2介导白藜三醇抑制血管平滑肌细胞增殖的机制研究

血管平滑肌细胞增殖在经皮冠状动脉成形术（PCI）后再狭窄的发生中起重要作用，本课题在前期研究发现白藜三醇通过下调醌氧化还原酶2（NQO2）的mRNA和蛋白表达水平从而抑制血管平滑肌细胞增殖的基础上，通过建立大鼠血管内皮剥脱术后血管再狭窄模型和NQO2高表达、低表达血管平滑肌细胞模型，验证白藜三醇通过NQO2调控血管平滑肌细胞增殖是否通过MEKK1-MEK1-ERK1/2信号通路实现，进而探讨NQO2 介导白藜三醇抑制血管平滑肌细胞增殖的分子机制。本课题的研究将进一步阐明白藜三醇通过NQO2调控血管平滑肌细胞增殖、降低再狭窄发生的机制，为今后白藜三醇作为冠心病二级预防以及血管再狭窄新的靶向治疗提供理论和实验依据，也为设计作用于特定靶分子的药物奠定基础。

【背景】经皮冠状动脉介入治疗（PCI）是目前冠心病治疗的重要手段，但术后再狭窄的发生率仍高达15%～20%。血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖、迁移是导致介入治疗术后血管内膜增厚和管腔狭窄的主要原因之一。. 一些天然多酚类物质可以和醌氧化还原酶2（NQO2）结构中活性位点特异性结合，抑制NQO2的活性并有效的抑制VSMC增殖。而大量研究证实细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）参与VSMC的增殖调节。细胞内活性氧（ROS）水平升高能够激活ERK1/2，进而引起VSMC的增殖。.【研究目的和内容】本课题的研究目的是要验证NQO2低表达时通过影响胞内ROS水平来使ERK1/2磷酸化水平改变，从而抑制VSMC的增殖。研究内容：（1）构建NQO2 RNA干扰慢病毒载体，使大鼠血管平滑肌细胞NQO2低表达，在体外研究NQO2低表达时VSMC增殖能力、细胞内ROS水平和ERK1/2的活化水平；（2）建立大鼠颈动脉球囊损伤再狭窄模型，使用NQO2 RNA干扰慢病毒载体作用于损伤的血管，观察NQO2低表达对血管损伤后新生内膜增生的抑制效应及机制。.【研究结果】1. 体外实验结果显示：.（1）NQO2 siRNA组NQO2 mRNA表达水平明显降低； NQO2 siRNA组NQO2蛋白表达减少；（2）在10%胎牛血清作用48h后，NQO2低表达能够明显抑制VSMC的增殖。（3）10%胎牛血清刺激30min后， NQO2 siRNA组中ROS升高水平明显降低。（4）10%胎牛血清刺激10min后， NQO2 siRNA组中的ERK1/2磷酸化水平明显降低。.2. 在体实验结果显示：.（1）在球囊损伤2周后，与PBS组相比，NQO2 siRNA组中的NQO2 mRNA的表达水平明显下降；NQO2蛋白表达水平亦明显降低。（2）NQO2低表达明显抑制球囊损伤后的大鼠颈动脉新生内膜形成。NQO2 siRNA病毒作用后明显降低了损伤后新生内膜中的PCNA阳性细胞比例。（3）NQO2 siRNA组较PBS和NC siRNA组中的ROS水平明显降低。（4）NQO2 siRNA病毒作用后明显抑制颈动脉血管的ERK1/2磷酸化水平。.【科学意义】.通过本研究进一步阐明NQO2抑制血管平滑肌细胞增殖的、降低血管再狭窄发生的机制，为今后NQO2作为治疗冠心病血管再狭窄新的靶蛋白提供理论和实验依据。