蓬子菜静脉活性成分及作用机理研究

It has been reported that Galium verum L.can be used to treat venous diseases. The objective of the present study is to extract the main bioactive constituents of Galium verum L. The structures of new compounds were determined using spectroscopy method. Then the pharmacological activities of the new compounds were investigated. The effects of active regions and constituents of Galium verum L. on E-selectin, P-selectin, intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1), and VE-Cadherin, which are correlated with venous diseases, were measured. The expressions of NF-κBp65, NF-κBp50, IκBa, IκKα, and IκKβ in the IκK/IκB/NF-κB signaling pathway were assayed by the method of RT-PCT and Western blot. The present study aimed to evaluate the relationship among the active regions and constituents, the pharmacological activities, and mechanisms of action. Therefore, the pharmacodynamic material basis and action mechanisms of Galium verum L. will be elucidated. It will not only improve the understanding about the efficacy and scientific connotation in Galium verum L. but also enrich the content of Traditional Chinese Medicine. Furthermore, it will also provide a theoretical basis for developing new medicines to treat venous diseases and.adequately making use of Galium verum L.

在已确定蓬子菜静脉活性部位及其主要药理活性的基础上，本项目拟对活性部位进行系统的化学分离，采用波谱学测试技术确定单体化合物的化学结构，并结合药效学研究确定蓬子菜静脉活性成分。在此基础上，考察有效部位和有效成分两个层次药效物质基础对E-选择素、P-选择素、ICAM-1、VCAM-1、VE-Cadherin等与静脉疾病密切相关的细胞因子水平的变化，检测IκK/IκB/NF-κB信号传导通路中NF-κBp65、NF-κBp50、IκBa、IκKα和IκKβmRNA及蛋白表达量的变化，探讨有效部位/有效成分?功效(药理作用)?作用机制的相关性，阐明蓬子菜各层次药效物质基础及其作用机制。本项目研究可深化对蓬子菜传统功效科学内涵的认识，丰富中医药学内容，并可为研制出疗效好、具有自主知识产权的治疗静脉系统疾病的新药，充分利用蓬子菜丰富的天然资源提供重要科学依据。

蓬子菜（Galium verum L.）是黑龙江省地产药材，野生资源十分丰富。黑龙江中医药大学附属第一医院历经数十年的临床研究证明，该药治疗静脉系统疾病的总有效率可达90%，并具有疗程短、疗效显著的特点。本课题在前期研究基础上（化学成分研究、生药学、药材质量标准、活性成分药代动力学等），应用各种色谱技术分离、纯化，得到蓬子菜总黄酮有效部位（含量75%）及活性单体成分（香叶木苷、木犀草苷、香叶木素-7-O-β-D-木糖-(1→6)-β-D-葡萄糖苷（DXG）），并对活性单体成分进行了结构鉴定，重点对蓬子菜的有效部位及单体活性成分的药效学和临床作用机制开展研究。结果表明：一、蓬子菜总黄酮及香叶木苷能明显改善血瘀大鼠的凝血功能，如延长凝血酶原时间( PT) 、活化部分凝血活酶时间( APTT) 、凝血酶时间( TT) 、降低纤维蛋白原( FIB) 及细胞粘附因子sICAM-1、sVCAM-1 的含量，通过调节抗凝血，改善血管内皮功能。二、蓬子菜总黄酮及香叶木苷能提升细胞内源性抗氧化酶活力，从而降低MDA和LDH含量（中、高剂量组效果较好）。三、启动凋亡信号通路，下调了Caspase-3、Caspase-7、Caspase-8、Caspase-9基因的表达，降低了Bcl-2含量，木犀草苷可下调CYC、Bax、Apaf-1 mRNA表达。四、明显提高了氧化损伤细胞（HUVECs）ERK通路蛋白表达，降低p53、JNK通路蛋白的表达，证明蓬子菜总黄酮及香叶木苷均具有明显的抗氧化损伤及保护血管的作用。五、抗肿瘤研究的实验结果表明，蓬子菜总黄酮及DXG具有抗急性早幼粒细胞白血病细胞（NB4 细胞）及人肝癌细胞（HepG2）增殖并诱导凋亡的作用。本项目将分子生物学及药效学与创新药物的早期开发相结合，首次对蓬子菜有效部位及活性单体成分进行药效学及作用机制研究，阐明了蓬子菜静脉活性的药效物质基础和临床治疗静脉系统疾病的作用机制。