基于足细胞粘附的抗早期糖尿病肾病药物筛选新方法

足细胞粘附力下降，导致其从肾小球基底膜(GBM)脱落是早期糖尿病肾病(DN)进展的关键，增加足细胞粘附对防治早期DN具有重要价值。足细胞粘附是一个动态、综合的过程，涉及粘附分子α3β1整合素与GBM的相互作用等，而传统检测足细胞粘附的方法为终点检测，无法动态观察，且常需要标记和损伤细胞。本项目首次建立一种无损伤、实时动态检测足细胞粘附的高通量药物筛选方法，在细胞水平准确、高效筛选增加足细胞粘附的化合物，进而用流式细胞术在分子水平筛选增加足细胞粘附分子α3β1整合素表达的化合物，最后在早期DN动物模型上证实筛选到的化合物在动物体内的疗效，以验证上述高通量药物筛选方法的可靠性、准确性和实用性。本项目拟建立一种基于足细胞粘附的实时动态高通量药物筛选新方法，从中草药中筛选增加足细胞粘附，从而减轻足细胞脱落的新型抗早期DN药物，具有重要的科学意义和应用价值。

足细胞粘附力下降，导致其从肾小球基底膜(GBM)脱落是早期糖尿病肾病(DN) 进展的关键，增加足细胞粘附对防治早期DN 具有重要价值。足细胞粘附是一个动态、综合的过程，涉及粘附分子α3β 1 整合素与GBM 的相互作用等，而传统检测足细胞粘附的方法为终点检测，无法动态观察，且常需要标记和损伤细胞。本项目已建立一种基于足细胞粘附的实时动态高通量药物筛选新方法，筛选增加足细胞粘附的新型抗早期DN药物。本研究建立了高糖刺激下的足细胞病理模型，同时设立正常糖对照组及高渗对照组，然后加入不同中草药化合物，采用xCELLigence系统检测足细胞粘附，该系统可每6分钟一次实时动态监测足细胞粘附，利用该系统在细胞水平准确、高效筛选增加足细胞粘附的化合物，然后采用流式细胞仪在分子水平进一步定量筛选增加足细胞α3β 1整合素表达的化合物，并采用Z′ 因子分析法评估高通量筛选系统的稳定性和可靠性，最后在STZ诱导的早期DN 动物模型上证实筛选到的化合物在动物体内的疗效。通过上述筛选方法，我们已从中草药化合物中发现黄芪甲苷(AS-IV)呈时间及剂量依赖性增加高糖刺激下的足细胞粘附力，在作用28小时及剂量为200μg/ml时达最大效应。动物实验研究进一步研究发现AS-IV能增加STZ诱导的DN大鼠足细胞α3β 1整合素表达，减轻足细胞脱落及凋亡，降低尿蛋白，改善肾脏病理损伤，从而有效防治早期DN, 这些全新的研究结果进一步验证了上述高通量药物筛选方法的可靠性、准确性和实用性。综上所述，本项目建立了基于足细胞粘附的抗早期DN药物筛选新方法，具有无损伤、实时动态检测、信息量大，且过程简洁、重复性好的优点，将极大加速抗早期DN新药的发现进程，具有重要的科学意义，其应用前景广阔。