G蛋白偶联受体GCR1、GCR2在植物感应N-酰基高丝氨酸内酯中的功能分析

N-acyl-homoserine lactones (AHLs)，the quorum-sensing signals used by gram-negative bacteria, can be perceived not only by bacteria their own, but also by their host plants, thereby modulate gene expression and cellular responses in plants. However, little is known about ABA signal perception and transduction. In our previous study, we found that plant G-protein coupled protein GCR1 and GCR2 are involved in AHL-mediated primary root elongation and defense response of Arabidopsis and we speculate that GCR1 and GCR2 are likely the membrane-localized receptor of AHL in plant cells. Based on the previous data, the aim of the present project is to investigate the direct interaction between Arabidopsis GCR1 or GCR2 and AHL, to analyze the receptor kinetics of AHL-binding to GCR1 or GCR2, and to further elucidate the function of GCR1 or GCR2 in AHL signaling in plant cell by a diversity of experimental approach including biacore, receptor kinetics analysis, immuno-co-precipitation, split-ubiquitin system and molecular genetics and etc. The out-come of this project will be of great important for understanding the molecular mechanism of regulating plant growth and development by AHL and AHL-mediated cross-kingdom signaling between bacteria and plant, and promoting the finding of ligands for orphan G-protein coupled receptors in plant.

细菌群体感应信号分子AHL不仅可以被细菌感知，而且可以被植物感知，进而调控植物的生长发育。但目前对植物如何感受AHL的分子机制尚不清楚，对植物中AHL的受体研究还是一个空白。我们前期研究表明植物G蛋白偶联受体GCR1、GCR2参与AHL调控植物根生长和防卫反应的信号转导过程，并提出GCR1、GCR2可能是植物细胞中AHL受体的假设。本项目旨在前期研究的基础上，采用免疫学、生物化学和分子遗传学方法研究拟南芥GCR1、GCR2蛋白与细菌AHL结合的可能性，GCR1、GCR2蛋白与细菌AHL结合的受体动力学特性，GCR1、GCR2蛋白在植物感应AHL信号转导途径中的功能。该研究如能确定GCR1、GCR2为植物细胞中AHL的受体，将为全面解析细菌AHL调控植物生长发育、介导原核细菌和真核植物之间信息交流的分子机制，为推动植物GPCR配基的研究奠定基础。因此，该研究具有重要的科学意义和实践意义。

细菌群体感应信号分子N-酰基高丝氨酸内酯（AHL）可以被植物感知，进而调控植物的生长发育，但是对植物如何感受AHL的分子机制尚不清楚，植物中AHL受体研究还是一个空白。本项目分析了拟南芥GCR1、GCR2蛋白与AHL信号分子3OC6-HSL结合的受体动力学特性及其在植物感应AHL信号转导途径中的功能，通过生物素标记-ELISA法、放射性配基分析法、微量热涌动（MST）法和生物膜层表面干涉（BLI）法等分子互作技术证实了植物GCR2蛋白是植物感应细菌AHL信号分子3OC6-HSL的受体；通过生物信息学和氨基酸定点突变技术确定了Lys(355)和Val(14)是GCR2与3OC6-HSL结合的关键位点；遗传学表型分析和基因表达分析表明GCR2参与细菌信号3OC6-HSL对植物主根生长的调控；泛素分离系统分析表明3OC6-HSL通过促进GCR2与其下游Gɑ蛋白的解离将信号向下游传导；通过双向荧光差异凝胶电泳技术分析了植物感应3OC6-HSL的膜蛋白质组变化，获得相关功能蛋白质的信息；通过功能分析确定钙调素（CaM）、转录因子MYB44、水杨酸（SA）信号系统分别是植物感应AHL调控其生长与抗病性的信号转导关键组分；遗传学表型分析和基因表达分析表明GCR1参与细菌信号3OC6-HSL对植物主根生长的调控，初步阐明GCR1在植物感应细菌AHL信号转导途径中的功能。这为全面解析细菌AHL调控植物生长发育、介导原核细菌和真核植物之间信息交流的分子机制、为推动植物GPCR配基的研究奠定了基础，具有重要的科学意义和实践意义。