从胃癌侧群细胞探讨健脾益气法对胃癌作用的细胞生物学机制

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，胃癌的转移复发已成为阻碍胃癌患者长期生存的关键因素。在寻找肿瘤抗转移、复发药物过程中，中药有可能成为新的途径，健脾益气法已证明对胃癌细胞具有促凋亡作用。在肿瘤的发生和发展中，一个具有无限自我更新、多向分化潜能等干细胞生物学特性的细胞群体即肿瘤干细胞可能在肿瘤的发生发展中起着决定性作用，胃癌干细胞研究的瓶颈至今未有突破。本课题立足于肿瘤干细胞学说理论基础，首先应用侧群细胞分选策略，并对其表达干细胞相关基因情况进行检测分析;用四君子方作用于侧群细胞进行体内外增殖、克隆形成、细胞侵袭能力、体内成瘤、等方面进行研究，探索四君子方作用于胃癌侧群细胞的作用机制，揭示健脾益气方剂对胃癌作用的规律有重要意义，为中药治疗胃癌奠定理论基础。

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，胃癌的转移复发已成为阻碍胃癌患者长期生存的关键因素。在寻找肿瘤抗转移、复发药物过程中，中药有可能成为新的途径，健脾益气法已证明对胃癌细胞具有促凋亡作用。在肿瘤的发生和发展中，一个具有无限自我更新、多向分化潜能等干细胞生物学特性的细胞群体即肿瘤干细胞可能在肿瘤的发生发展中起着决定性作用， 胃癌干细胞研究的瓶颈至今未有突破。 本课题立足于肿瘤干细胞学说理论基础，首先应用侧群细胞分选策略，并对其表达干细胞相关基因情况进行检测分析;用四君子方作用于侧群细胞进行体内外增殖、克隆形成、细胞侵袭能力、体内成瘤、等方面进行研究，探索四君子方作用于胃癌侧群细胞的作用机制，通过反复多次的实验，我们发现筛选出的胃癌细胞株（SGC-7901、BGC-823）均存在侧群细胞，并且比例较为稳定，其中SGC-7901 SP比例为2.57±1.56%、BGC-823 SP比例为2.62±1.03%，并且通过体外增殖实验、克隆实验及侵袭实验、成瘤实验验证了SP细胞比NSP细胞有更高的增殖、克隆、侵袭及成瘤能力。在四君子汤及各拆方干预后我们观察到SP细胞的增殖能力、克隆能力、侵袭能力及成瘤能力均有明显的降低，并且随着药物浓度升高，改变的越明显，通过对细胞蛋白的提取，我们发现在药物干预后，SP细胞的凋亡蛋白BAX/Bcl-2, Caspase家族、Cytochrome C、PARP的表达均有明显的上调，这说明SP细胞四君子汤作用于SP细胞可能是激活的线粒体的凋亡通路导致细胞的凋亡增加，增殖减缓，成瘤能力减弱。之后我有对SP细胞成瘤裸鼠进行了药物干预，同样发现小鼠的成瘤率明显降低，成瘤小鼠的瘤体增殖速度明显减缓，通过对成瘤小鼠的瘤体切片并行BAX/Bcl-2, Caspase家族、Cytochrome C、PARP、Ki-67等进行免疫组化标记，得到了和细胞实验相同的结果。通过本课题地研究，我们认为该健脾益气方（四君子汤）可以通过线粒体凋亡途径有效地抑制胃癌SP细胞增殖，促进细胞凋亡。为中药治疗胃癌奠定一定的理论基础。