电针与基因干扰调节NF-KB信号通路中IKK复合物的活性抑制局灶脑缺血/再灌注后炎性反应的机制研究

The inflammatory injury is the important and main pathological process after focal cerebral ischemia/reperfusion, which could induce myriad damage mechanism activated by the cascade amplification, then enhanced the ischemic brain tissue damage. Therefore, to effectively inhibit the inflammatory injury is the key element and important point for the effective treatment for the ischemic stroke. This subject adopts middle cerebral artery occlusion and reperfusion model and micro-glia which was exposed to oxygen glucose deprivation and reperfusion(OGD/R, the neuron and micro-glia co-cultivation). We used the electroacupuncture and Gene siRNA in this research, built the study system that the microglia was considered to be the study target, regulated the activation of the key enzyme-IKKs which in the NF-κB signaling pathway, to explicit the effect and activation of the subunits of IKKs. Figure out the effect targets and function mechanism of electroacupuncture on the NF-κB signaling pathway in order to confirm the function and mechanism of EA on the inflammatory injury after focal cerebral ischemia/reperfusion. We observe the morphological structure and function of neurons to validate the important significance in inhibiting microglia inflammation, to make deeper understanding and provide the evidence of the mechanism of electroacupuncture to aliemorate the inflammatory injury. At last,this subject will explore the definitive targets of nonmedicine treatment for cerebral ischemia and other diseases related to inflammation,further clarity the anti-inflammatory mechanism and scientificalness of electroacupuncture.

炎性反应是局灶脑缺血/再灌注后重要的病理损伤过程，能促进多种损害机制激活，加重脑组织的破坏，因此，有效抑制炎性损害成为提高缺血性脑卒中疗效的关键和重点。本课题拟用SD大鼠大脑中动脉闭塞/再通模型及小胶质细胞氧糖剥夺/复氧（与神经元共培养）模型，以电针为主要干预手段，利用基因沉默及过表达的方法，建立以小胶质细胞为研究载体，对NF-κB信号通路中关键激酶—IKK复合物的活性进行干预的研究体系，明确IKK各亚基在激活NF-κB信号通路中的活化作用；探讨电针调节NF-κB信号通路的作用靶点和调节机制以深度探讨和明确电针抑制脑缺血/再灌注后炎性损害的作用机制；观察抑制炎性反应后的神经元的形态、结构及功能验证抑制小胶质细胞炎症的重要作用和意义，为深入认识电针抑制脑缺血后炎性损害的机制提供更确切的证据；为“非药物”手段治疗脑缺血及其它炎症相关疾病提供确切的靶点和研究概念.

炎性反应是局灶脑缺血/再灌注后重要的病理损伤过程，能促进多种损害机制激活，加重脑组织的破坏，因此，有效抑制炎性损害成为提高缺血性脑卒中疗效的关键和重点。本课题拟用SD大鼠大脑中动脉闭塞/再通模型及小胶质细胞氧糖剥夺/复氧（与神经元共培养）模型，以电针为主要干预手段，利用基因沉默及过表达的方法，建立以小胶质细胞为研究载体，对NF-κB信号通路中关键激酶—IKK复合物的活性进行干预的研究体系，明确IKK各亚基在激活NF-κB信号通路中的活化作用；探讨电针调节NF-κB信号通路的作用靶点和调节机制以深度探讨和明确电针抑制脑缺血/再灌注后炎性损害的作用机制；观察抑制炎性反应后的神经元的形态、结构及功能验证抑制小胶质细胞炎症的重要作用和意义，为深入认识电针抑制脑缺血后炎性损害的机制提供更确切的证据；为“非药物”手段治疗脑缺血及其它炎症相关疾病提供确切的靶点和研究概念.该项目①以NF-κB信号通路为研究核心和基础，以此为拓展基础，运用电针作为干预手段，显示以IKKβ基因沉默后能有效抑制脑缺血再灌注后炎症反应的活跃，提示IKKβ为激活NF-κB信号通路的重要关键蛋白，证实了课题前期假说，完善项目预期。②锌指蛋白A20及肿瘤抑制因子(cylindromatosis,CYLD) 是炎症信号转导的中心调节因子NF-κB 信号通路上关键的负反馈抑制因子（NF-κB 抑制因子），通过其泛素编辑酶作用，阻断多条上游炎症受体信号（ TNF-α、IL-1、TLR、BCR、TCR 等）对 NF-κB 通路的激活，抑制下游炎症因子转录，发挥强有力的抗炎作用，被认为是炎症反应中关键性的内源性保护因子，从而调控阻止了NF-κB核转移和抑制神经CX3CL1表达，抑制了微神经胶质的激活。在脑缺血/再灌注后可以缓解炎症性损伤方面起到重要干预作用。本课题的完成将会为深入研究“内源性神经保护机制”、“有效抑炎症迆度反应”机制提供新的突破