基于肝癌细胞外泌体来源的免疫相关蛋白和RNAs探讨癌痛消方抗HCC作用的机制研究

HCC is one of the popular caner in the world and because of limitation of the therapeutic strategies of HCC and the risk of the disease，exploring the new targets and the strategies is becoming hotspot and medical difficulty. Data showed that exosome can regulate immune activity via regulating the expression profile of the proteins and RNAs. Previously we found that the efficiency of the Chinese medicine Aixiaokeli on treating HCC is 88.89% and it showed a great effect on apoptosis and the inflammatory factors. In order to analysis the targets and the effect of aixiaokeli，we will use the cell lines and the patients to examine the effect of Aixiaokeli, we will separate the exosomes and use Proteomics，RNAs examination and the FCM flow cytometer. This program will provide a new possible the clinical and the foundation research

原发性肝癌（HCC）是世界上最常见恶性肿瘤之一，已成为危害人类健康的重要因素。探索HCC有效的防治策略及效应机制是目前研究的热点。外泌体是由细胞内形成并分泌到细胞外的囊泡小体，是细胞间通讯和信息传递的新模式。研究表明肝癌细胞通过释放外泌体促进癌基因、功能蛋白分子、肿瘤相关RNAs的转移而对肿瘤的发生发展、侵袭转移产生影响。本课题组前期研究发现癌痛消中药复方治疗HCC能使肿瘤体积缩小并明显降低患者AFP水平，其机制与促进肝癌细胞凋亡和提高免疫功能有关。本研究拟用癌痛消方含药血清体外干预癌活性肝细胞系和非癌活性肝细胞系，检测实验细胞释放外泌体的含量变化、并应用蛋白质组学、离子激流测序、流式细胞技术等方法观察含药血清通过调节实验细胞来源的外泌体蛋白分子、RNAs对肝癌细胞发生发展和侵袭转移能力、以及对293T细胞的影响，探讨癌痛消方通过外泌体调节免疫功能的效应靶点，以及抗HCC的细胞和分子机制。

本研究在前期工作基础上，探讨了癌痛消方通过外泌体对肝癌进展的影响。通过研究发现，癌痛消方具有抑制肝细胞癌具有生长，降低细胞侵袭和转移的作用，且肝癌外泌体对免疫功能具有调节作用。为进一步明确癌痛消方对外泌体的调节作用，课题组检测了肝癌动物模型的血浆和血浆外泌体中蛋白及miRNA的变化。研究发现：癌痛消方不同拆方对蛋白质调节数量和效果不同，全方组与模型组比较存在126个差异蛋白，其中63个上升，63个下降；清热方与模型组比较存在114个差异蛋白，其中54个上升，60个下降；补虚方与模型组比较存在194个差异蛋白，其中112个上调，82个下调。全方组的差异蛋白主要集中在代谢和神经系统上，同时对消化系统，内分泌和环境适应性上也有调节；而清热方的差异蛋白主要体现在内分泌系统、多糖的生物合成与代谢；而补虚方的差异蛋白主要体现在细胞生长和死亡，以及内分泌系统，在消化系统，神经系统，排泄系统，感觉系统，以及信号转导方面。癌痛消方不同拆方对肝癌外泌体RNA的影响也不同，全方有14个差异miRNA，这些miRNA的靶基因主要与细胞增殖、凋亡、坏死、炎症及血管生成等有关。结论：癌痛消方具有一定的抗肝癌作用，其作用有可能通过调节外泌体蛋白或RNA调节，影响机体免疫功能发挥作用。