雷公藤甲素微乳凝胶外用治疗类风湿性关节炎的作用机理研究

Rheumatoid arthritis (RA) is common autoimmune diseases mainly characterized by synovitis. Tripterygium Wilfordii has positive curative effect for RA, and the triptolide is the primary active ingredient, its oral preparations with unambiguous therapeutic effect, however, the toxic and side-effect of which severely limits the usage. Since 1990s, the study on the external application of Tripterygium Wilfordii has been developed, which only involved general pharmacodynamics, transdermal case, the option of penetration enhancer and so on. The mechanism of action in Tripterygium topical therapy for RA yet reported in the literature. Studies have shown that tripterygium topically used not entirely dependent on the drug concentration in blood for treatment of RA. As topical preparations were absorbed through the skin, which is a unique immune tissue organ, the dendritic cell/ Langerhans cells(LC) of skin has a close relationship with immune activation and immune tolerance, which plays the important role in the regulation of organ immune. The project proposed external application of triptolide microemulsion gel to study its pharmacokinetics in joints, the impact of synovial cell apoptosis, and effect on the number of CIA rat skin LC morphology, differentiation, maturation and other immune function, and the impact on the immune function of synovial cells, in order to investigate the mechanism of transdermal therapeutic effect of RA.

类风湿性关节炎(RA)是以关节滑膜炎为主要特征的常见自身免疫性疾病。 雷公藤是治疗 RA 疗效肯定的中药，雷公藤甲素是主要有效成分，其口服制剂疗效明确，但毒副作用严重限制了口服制剂的使用。雷公藤外用治疗 RA疗效好毒副作用少。20 世纪90年代以来开展了雷公藤外用的研究，仅涉及一般的药效学、透皮情况、促渗剂选用等，雷公藤外用治疗 RA的作用机理无文献报道。研究表明雷公藤外用对RA治疗作用不完全依赖血液中药物浓度。由于外用制剂是通过皮肤吸收，皮肤是一具有独特免疫功能的组织器官，皮肤树突状细胞/朗格汉氏细胞（LC）与免疫激活和免疫耐受关系密切,在调控机体免疫方面起着重要作用。本项目拟通过雷公藤甲素微乳凝胶外用，研究其在关节局部药动学，对滑膜细胞凋亡的影响，及对CIA大鼠皮肤LC数量形态、发生、分化、成熟等免疫功能的影响；以及对关节滑膜细胞免疫功能的影响，探讨经皮给药治疗RA作用机理。

类风湿性关节炎(RA)是以关节滑膜炎为主要特征的常见自身免疫性疾病。雷公藤甲素（TP）是雷公藤的主要有效成分，其口服制剂治疗RA疗效明确，但毒副作用严重。雷公藤外用治疗 RA疗效确切、毒副作用少。课题组前期研究表明TP外用对RA治疗作用不完全依赖血液中药物浓度。由于外用制剂是通过皮肤吸收，皮肤是具有独特免疫功能的组织器官，皮肤树突状细胞（DC）与免疫激活和免疫耐受关系密切,在调控机体免疫方面起着重要作用。本项目对TP微乳凝胶外用治疗RA机理进行了研究，包括TP微乳凝胶大鼠皮肤及关节局部药动学研究、对滑膜细胞凋亡的影响，对CIA大鼠皮肤DC细胞数量形态、发生、分化、成熟等免疫功能的影响；对关节滑膜细胞免疫功能的影响研究。结果如下：在活体大鼠皮下和CIA模型大鼠关节腔中药动学结果表明，TP微乳凝胶能够透过皮肤、关节囊外层的纤维层和滑膜层进入关节腔中，2.4h达到最大浓度且作用时间较长；TP微乳凝胶对滑膜细胞凋亡、对CIA大鼠皮肤DC细胞数量形态、发生、分化、成熟等免疫功能的影响、及对关节滑膜细胞免疫功能的影响研究表明，TP微乳凝胶高剂量组、中剂量组、TP微乳高剂量组和TP溶液口服组均能显著性降低IL-1、PGE-2、TNF-α含量和CD80、CD86的表达水平，除TP微乳高剂量组对PGE-2外，其余的较模型比较均具有显著性差异（P<0.05）。TP微乳凝胶低剂量组虽一定程度上降低IL-1、PGE-2、TNF-α含量和CD80、CD86的表达水平，但较模型组无显著性差异。根据实验结果可知RA的发病与IL-1、PGE-2、TNF-α的含量和CD80和CD86的表达有明显的关。TP无论是口服还是经皮给药治疗RA均有一定的效果，一定程度上能够降低IL-1、PGE-2、TNF-α的含量和CD80和CD86的表达，表明TP微乳凝胶通过特有的吸收路径对皮肤免疫系统，调节免疫应答，诱导免疫耐受，降低机体对自身抗原的免疫反应，抑制滑膜组织对关节软骨的侵蚀破坏，从而起到治疗类风湿性关节炎的作用，TP外用治疗RA的机理与局部抗炎及促进增殖滑膜细胞凋亡有关。本研究为雷公藤制剂的外用及临床合理用药提供重要的研究方法和理论依据。