尿液exosome基因表达检测及其在肾脏纤维化诊断中的价值探讨

慢性肾脏病（CKD）进展为终末期肾衰的关键是肾脏进行性纤维化，目前诊断肾脏纤维化（RF）主要依靠肾活检，临床尚无特异、敏感的无创性检测方法。我们前期的研究表明，尿液中存在与纤维化过程关联的基因标志物。尿液exosome不仅包含源细胞蛋白成分，而且还承载了丰富的基因表达信息,这种基因信息来自功能活性细胞且更为稳定，为研究尿液基因标志物提供了全新的平台。本研究将在前期对肾脏纤维化发生机制和尿液生物标志物研究基础上，通过对尿液exosome分离、基因检测相关影响因素的研究，建立稳定的尿液exosome分离和基因检测方法；通过对尿液exosome肾脏纤维化相关基因从基因芯片筛查到RT-PCR、临床病理学关联分析的验证研究，探讨尿液exosome基因表达在肾脏纤维化诊断中的价值，为临床早期、动态检测肾脏纤维化进展寻找新型生物标志物。

慢性肾脏病（chronic kidney disease, CKD）进展为终末期肾衰的关键是肾脏进行性纤维化，然而，目前临床在体无创检测肾脏纤维化仍十分困难。最新的研究发现，尿液exosome中包含了丰富的基因表达信息,为研究尿液生物标志物提供了全新的途径。本研究成功建立了尿液exosome分离、提取和鉴定方法，并对相关条件进行优化，对尿液exosome内mRNA, miRNA建立了具有高敏感性、高可重复性的定量检测方法；在此方法基础上，我们发现尿液exosome中的ACE2 mRNA在不同CKD分期病人中呈现不同水平，与肾小球硬化和肾脏功能密切相关，尤其是对已存在肾脏功能下降的病人；我们还发现，尿液exosome中足细胞相关基因CD2AP表达在CKD组显著下降，并与肾脏纤维化、蛋白尿和肾脏功能均密切相关；exosome是miRNA存在的主要形式，本项目通过筛查与肾脏纤维化密切相关miRNA的表达，发现其中miR-29c与肾脏功能和小管间质纤维化密切相关。本研究工作为肾脏纤维化生物标志物研究开辟了全新的研究方向和技术平台，所发现的exosome 内相关基因可能成为肾脏纤维化无创、动态监测的新型标志物。