同步化细菌群体制备技术的改进及其应用于抗菌药物敏感性检测的研究

建立由连续培养初筛和流式细胞术分选相结合的制备同步化细菌群体的技术平台，利用该平台培养并分选大肠杆菌E.coli CVCC 249。通过测定分选后菌群的活细胞比率、细胞尺度分布、还原MTT (噻唑盐)活性、β-半乳糖苷酶活性，以及群体生长的动力学参数，来评价分选菌群的均质性。用流式细胞术和激光共聚焦显微技术测定均质性菌群中个体细胞的细胞周期时相，以判定细胞的同步性。将同步细胞群体和非同步细胞群体接种至含有抗生素液体培养基后，进行连续培养以模拟用药状态下的体内代谢系统，测定它们在不同抗生素选择压力下残留的CFU（活菌数）。通过用CKC 杀菌动力学方程拟合CFU―药物浓度数据，由BC50（1/2杀菌率）等参数来定量表征细菌对抗菌药物的敏感性。研究结果将为解决因群体异质性导致无法得到确定性药敏试验结果和模拟体内条件下抗生素对细菌作用这类难题，以及进一步探讨细菌抗药性和耐药性形成机制提供技术支持。