活血益气中药干预动脉粥样硬化缺血心肌巨噬细胞-线粒体关键环节的机制研究

Regulating the inflammatory response and improving energy metabolism in the ischemic myocardium is two important means on prevention and treatment of coronary heart disease. We observe the mechanism of the nourishing-qi and activating blood TCM medicine（Jingzhixuefu capsule and Xinyue capsule）, which had effective results on clinical research, on macrophage related inflammatory reaction and ischemic myocardium related energy metabolism through the whole, cellular and molecular level experiments. In in vivo, we evaluate the mechanism of Jingzhixuefu capsule on inflammatory markers of early AS and macrophage substitute activation in rat with AS, and explore the target point of Jingzhixuefu capsule and Xinyue capsule on differential mitochondrial proteins and AMPK activated passway (glucose metabolic passway, fatty acids metabolic passway, mitochondrial biosynthesis passway) in rat suffered with AS and ischemic myocardium. In in vitro, we evaluate the effects of Jingzhixuefu capsule on macrophage substitute activation in bone marrow derived macrophage, and identify the molecular mechanism of Jingzhixuefu capsule and Xinyue capsule on protecting anoxia myocardial cells. It will be great significance in explaining the effects of the nourishing-qi and activating-blood TCM medicine, which could improve the prognosis of coronary heart disease.

调节炎症反应和优化缺血心肌能量代谢是现今冠心病防治的两种重要手段。本课题以临床研究中疗效明确的益气活血中药（精制血府胶囊与心悦胶囊）作为干预药物，从整体、细胞、分子水平研究其干预动脉粥样硬化（AS）巨噬细胞相关炎症反应和缺血心肌线粒体相关能量代谢的调控机制。在体研究通过AS模型和AS缺血心肌共存模型，从筛选出的早期AS炎性分子标记物和巨噬细胞替代活化方面评价精制血府胶囊抗AS的作用机制，从线粒体差异蛋白表达和AMPK活化相关通路（葡萄糖代谢通路、脂肪酸代谢通路、线粒体生物合成通路）探索精制血府胶囊联合心悦胶囊改善心肌能量代谢的作用靶点。体外研究应用骨髓源性巨噬细胞和原代培养心肌细胞缺氧模型，评价精制血府胶囊对巨噬细胞替代活化的影响以及明确精制血府胶囊联合心悦胶囊保护缺氧心肌细胞的分子机制。这些对于阐释益气活血中药改善冠心病临床预后的机制具有重要意义。

【项目背景】调节炎症反应和优化缺血心肌能量代谢是现今冠心病防治的两种重要手段。本课题以临床疗效明确的活血益气中药（精制血府胶囊与心悦胶囊）作为干预药物，研究其干预AS巨噬细胞相关炎症反应、缺血心肌能量代谢的调控机制。.【研究内容】在体研究通过AS模型和AS缺血心肌模型，从筛选出的早期AS炎性分子标记物、巨噬细胞替代活化方面评价精制血府胶囊抗AS的作用机制，从线粒体差异蛋白表达和AMPK活化相关通路探索活蟹益气中药改善心肌能量代谢的作用靶点。体外研究应用骨髓源性巨噬细胞和原代培养心肌细胞缺氧模型，评价精制血府胶囊对巨噬细胞替代活化的影响，明确活血益气中药保护缺氧心肌细胞的分子机制。.【重要结果】在体研究：①不同周龄Apoe—/—小鼠AS炎症差异基因的表达谱数量呈动态变化；②精制血府胶囊可通过调节血脂代谢、抑制炎症反应减轻Apoe—/—小鼠AS早期的血管改变；③AMI后大鼠心肌线粒体氧化磷酸化蛋白表达上调；④活血益气中药可以促进心肌线粒体生物合成，保护AMI大鼠的缺血心肌。体外研究：①精制血府胶囊可以促进AS早期巨噬细胞替代活化；②活血益气中药可以抑制心肌细胞早期凋亡，改善缺氧心肌细胞的能量代谢。.【关键数据】在体研究：①Apoe—/—小鼠10周AS炎症差异基因表达升高的为IL-12ɑ和MMP-12，下降的为IL-1β；15、25周升高的为GDF-15；②精制血府胶囊可以降低Apoe—/—小鼠血清TG、LDL-C、IL-8，升高HDL-C、IL-10；③AMI后大鼠心肌线粒体蛋白上调最显著的为Noth3、Csmd2、Myh7。体外研究：①精制血府胶囊可以促进巨噬细胞分泌IL-10、TGF-β；②活血益气中药干预后缺氧心肌细胞早期凋亡率为26.8%，伴AMP浓度明显上升，其机制可能与AMPK活化糖代谢GLUT4- PFK2通路、脂代谢FAT/CD36-ACC2通路、线粒体生物合成PGC1ɑ通路等有关。.【科学意义】活血益气中药可以从整体、细胞、分子水平调节与巨噬细胞替代活化相关的AS炎症反应，优化缺血心肌AMPK通路相关的能量代谢，对于改善冠心病的临床疗效和预后具有重要意义。