以毒攻毒法治疗结直肠癌的分子机制及毒效相关性研究

A important guideline of traditional Chinese medicine treating difficult disease is combat poison with poison method，for example using it in treatment of malignant tumors.Modern physician applying combat poison with poison method in the treatment of malignant tumors has achieved significant effect.In order to reveal the scientific connotation of combat poison with poison method in the treatment of colorectal cancer,on the basis of previous research,we select gamboges as representative of toxic Chinese medicine which has a treatment of colorectal cancer.To explore the effect of gamboges in two different pathogenesis colorectal cancer,such as inhibition of tumor growth,dose-response relationship,correlation between toxicity and efficacy,target and process in signal pathway.Providing scientific support and theoretical basis for safety and effective clinical application of combat poison with poison method in the treatment of colorectal cancer,and explore new way in search of traditional Chinese medicine of specific effect in colorectal cancer.

以毒攻毒法是中医治疗恶性肿瘤等重大疑难疾病的重要法则，现代医家应用以毒攻毒法治疗恶性肿瘤取得了显著疗效。为揭示以毒攻毒法治疗结直肠癌以毒取效的科学内涵，我们在前期研究基础上，选用确有抗结直肠癌作用的有毒中药藤黄为代表，研究其对两种不同发生途径的结直肠癌的抑制效应、量效关系、毒效相关性和信号通路上的作用靶点、干预环节，为临床安全有效应用以毒攻毒法治疗结直肠癌，提供科学支撑和理论依据，并为寻找具有特异抗结直肠癌作用的中药探索新途径。

在我国，结直肠肿瘤的发病率呈现上升趋势，但是对其仍缺乏特异有效的治疗药物和方式。以毒攻毒法是中医治疗恶性肿瘤等重大疑难疾病的重要法则，取得了显著疗效和丰硕的成果。藤黄作为药物使用，在我国已有悠久的历史。. 研究内容可主要分为以下几个部分：第一部分 通过相关毒理学研究，探讨藤黄的毒效相关性。第二部分 建立裸鼠原位移植瘤模型，探讨藤黄抗结直肠肿瘤作用。第三部分 探讨藤黄抑制肿瘤细胞增殖和侵袭的发生机制。第四部分 探讨藤黄有效成分藤黄酸发挥抗肿瘤作用的机制。. 在毒理学研究方面，藤黄醇提取物对昆明小鼠的半数致死量LD50为1.691g/kg，对裸鼠的半数致死量LD50为0.809g/kg。藤黄醇提取物的最大耐受量为0.21g/kg。藤黄醇提取物的蓄积系数为2.92,其蓄积毒性表现主要是肝毒性。. 在体内研究方面，通过对移植瘤重量和体积进行检测，结果表明伊立替康组、5-FU组、藤黄高中低剂量组均可显著抑制肿瘤生长（p<0.05）；免疫组化结果显示，伊立替康组、5-FU组、藤黄高剂量组可显著下调β-catenin、MMP-7蛋白的表达，伊立替康组、5-FU组、藤黄高中低剂量组均可明显下调Cyclin D1的表达（p<0.05）。在体外研究方面，CCK-8实验结果表明，藤黄在给药24h、48h、72h后均能显著抑制HCT116、SW480细胞增殖（P<0.05），并且呈时间及浓度依赖性（P<0.05）；AnnexinV-FITC/PI双染法结果显示，不同浓度的藤黄均能诱导肿瘤细胞凋亡（P<0.05），呈浓度依赖性；流式细胞术结果显示，藤黄能够抑制肿瘤细胞从G1向S期转换，使细胞阻滞于G1期；Transwell侵袭实验结果表明，不同浓度的藤黄均能显著抑制肿瘤细胞侵袭（P<0.05），并且呈浓度依赖性；Western blot及PCR结果显示，藤黄能够显著下调Wnt经典通路中关键分子β-catenin的表达，并且在藤黄干预后，细胞内下游分子Cyclin D1、MMP-7的表达量也明显下调；免疫荧光实验显示，藤黄能显著下调β-catenin在细胞核内的分布（P<0.05），并且呈浓度依赖性。在对藤黄酸进行的体外实验中，也有相似结果出现。. 本研究初步揭示以毒攻毒法治疗结直肠癌以毒取效的科学内涵，为临床安全有效应用该法治疗结直肠癌提供科学支撑和理论依据。