平胃散调控湿阻中焦证致水通道蛋白异常表达的机制研究

湿阻中焦证是临床常见证候，前期研究发现，湿阻中焦证模型大鼠水通道蛋白AQP3、AQP4表达下降，血管加压素（AVP）水平升高，经平胃散治疗后，AQP3、AQP4表达升高，AVP水平降低，提示AQP3、AQP4与AQP2调节机制密切相关的AVP可能反映了平胃散的作用机制及湿阻中焦证的部分证本质。因中医证候多系统、多层次、多靶点的特点，本课题拟以胃肠道已知的7个水通道蛋白亚型为切入点，以前期较成熟湿阻中焦证动物模型为平台，以平胃散为反证，通过对胃肠道水通道蛋白的分布﹑定量、活性、定位，通过激素调节、泛素化调节，相关调控机制的系统研究，开展湿阻中焦证在水平衡方面的证本质研究。运用FQ-PCR法、Western Blot法、免疫印迹法、免疫荧光技术、放免法、酶联免疫法等先进手段，完善湿阻中焦证证本质研究，揭示平胃散的作用机制。为中医证候研究提供新思路。为中药复方水通道调节剂研究提供新思路。

湿阻中焦证是临床常见证候，多用平胃散祛湿健脾，水通道蛋白是维持体内水代谢平衡的分子学基础。通过对水通道蛋白生理和病理性分布、含量，以及相关转导因子分析研究，揭示其表达特点和水液代谢调节机制。. 胃肠水通道蛋白生理和病理性表达研究：检测了大鼠贲门、胃体、幽门和十二指肠、空肠、结肠、直肠AQP0、AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、AQP5、AQP7、AQP8和AQP9。①表达增加：AQP1在胃贲门和空肠粘膜，AQP2在空肠组织、大肠粘膜及直肠组织，AQP3在胃贲门的粘膜、空肠组织及结肠粘膜，AQP4在贲门粘膜，AQP5在直肠粘膜，AQP7在贲门组织、空肠及直肠粘膜，AQP9在贲门组织表达增加；②表达减少：AQP1在贲门组织和胃体粘膜，AQP2在胃体粘膜和结肠组织，AQP5在胃体粘膜下组织，AQP7在胃体和空肠组织，AQP9在贲门粘膜、胃体组织及空肠组织表达减少。此外，AQP8表达不明显。. 平胃散干预湿阻中焦证动物模型胃肠水通道蛋白的表达研究：①表达增强：AQP1在贲门组织、胃体及空肠粘膜；AQP2在胃体粘膜、结肠粘膜及直肠组织；AQP3在空肠；AQP5在直肠粘膜；AQP9在增强贲门粘膜和胃体组织表达增强；②表达抑制：AQP1在贲门粘膜，AQP2在结肠组织，AQP3在贲门和结肠粘膜，AQP4贲门粘膜表达抑制。.　　湿阻中焦证动物模型水液代谢调节机制的研究：①长时调节机制：造模后AQP0在结肠组织、AQP2在直肠组织、AQP3在空肠组织和粘膜，经平胃散干预后AQP0在空肠组织、AQP1在贲门组织和胃体粘膜、AQP2在直肠和空肠组织、AQP3在结肠和直肠组织、AQP9在胃体粘膜和组织含量皆上升；造模后AQP0在结肠组织、AQP1在贲门组织和胃体粘膜、AQP2在结肠组织、AQP3在空肠和结肠组织、AQP9在胃体粘膜和组织，经平胃散干预后AQP2在结肠组织、AQP3在结肠粘膜含量下降。②短时调节机制：AC-cAMP-PKA 信号转导途径中的各因子如： AC、cAMP、PKA与湿阻中焦证胃中组织AVP、VIP变化趋势相同；PLC-IP3/DG-CaM/PKC 信号转导途径信号分子如：PLC、IP3、CaM、Ca2+与湿阻中焦证肠道相关激素AVP、VIP在血清中的含量降低，但自然恢复组呈下降趋势，故肠道的信号转导途径与胃基本一致。