从树突状细胞的免疫耐受探讨祛风通络法治疗类风湿关节炎的分子基础

类风湿关节炎(RA)属祖国医学痹证范畴，是一种以多关节慢性滑膜组织炎症为主要表现的自身免疫性疾病。树突状细胞(DCs)是机体的免疫调节"中枢"，调节免疫应答和免疫耐受，其免疫耐受功能失常是RA发病的中心环节。祛风通络法是中医药治疗RA的基本大法，我们在前一个国家自然科学基金的资助下阐明了祛风通络中药单体青藤碱治疗RA的作用可能与抑制了树突状细胞(DCs)免疫应答功能有关。在前期工作的基础上，本课题拟深入探讨RA祛风通络治法的分子基础，以研究祛风通络药物对DCs免疫耐受的功能及机制为主要内容。观察祛风通络中药干预后DCs在体外诱导调节性T细胞生成的能力，并评价干预后DCs对RA动物模型的治疗作用及DCs在体内器官组织的分布；同时研究祛风通络中药对DCs泛素-蛋白酶体系及趋化因子受体表达的影响，为阐明祛风通络法治疗RA的分子基础和RA的中医药治疗提供现代科学的支持。

类风湿关节炎(RA)属祖国医学痹证范畴，是一种以多关节慢性滑膜组织炎症为主要表现的自身免疫性疾病。树突状细胞(DCs)是机体的免疫调节“中枢”，调节免疫应答和免疫耐受，其免疫耐受功能失常是RA发病的中心环节。祛风通络法是中医药治疗RA的基本大法。在前一个国家自然科学基金的资助下，我们阐明了祛风通络中药单体青藤碱治疗RA的作用可能与抑制了DCs免疫应答功能有关。本课题拟继续深入探讨RA祛风通络治法的分子基础，以研究祛风通络药物对DCs免疫耐受的功能及机制为主要内容。我们根据申请书和计划书的工作计划展开工作，主要取得了以下的成果：1.建立DCs的体外培养体系，采用GM-CSF联合IL-4刺激外周血单核细胞的方法获得人外周血DCs，并通过形态学、表型和功能进行鉴定。2.以RA为代表疾病，观察了不同疾病活动期RA患者外周血趋化因子受体CCR5和CCR7的表达。研究提示，类风湿关节炎患者外周DCs表面CCR5和CCR7的表达与RA疾病活动有相关关系，可能成为监测类风湿关节炎疾病活动和治疗效果的指标。3.观察青藤碱对DCs趋化因子的分泌及相关受体表达的影响，研究发现青藤碱可抑制DCs表面趋化因子受体的表达，而且青藤碱可有效抑制DCs分泌CXCL9、CXCL10、CXCL11。4.观察青藤碱对类风湿关节炎患者DCs泛素-蛋白酶体系中重要蛋白表达的干预作用，研究结果提示青藤碱可能通过抑制泛素-蛋白酶体的功能，降低了NF-κB途径的磷酸化，从而影响了DCs的分化成熟，达到免疫抑制的作用。5.研究加味宣痹汤联合甲氨喋呤治疗活动性类风湿关节炎近期疗效，联合使用加味宣痹汤和甲氨蝶呤治疗活动期RA患者，可以更好改善疾病活动，控制炎症指标，严格控制疾病发展，是较好的中西医结合治疗手段。6.观察体外干预DCs对调节性T细胞（Treg）的诱导能力，研究发现青藤碱干预后的DCs可显著增加共培养T细胞中Treg细胞的数量，干预后DC与T细胞共培养后分泌IL-10和TGF-β增加，IL-12的表达降低。7.采用II型胶原联合佐剂的方法制备了CIA大鼠模型；8.检测干预后DCs对CIA大鼠治疗的作用，研究发现干预后DCs以尾静脉注射方式回输CIA大鼠可有效改善CIA大鼠关节炎症，并可降低外周血中炎性因子的表达。上述研究成果为阐明祛风通络法治疗RA的分子基础提供现代科学的支持。