基于MAPK通路对睾丸支持细胞的影响探讨强精片改善弱精子症大鼠精子质量的研究

At present researches on male sterility mainly focus on the deficiency of spermatogenetic function. But large clinical research indicate that asthenospermia is an important factor of male sterility. Research on the mechanism of asthenospermia largely emphasize the mitochondrion and nuclear gene of the sperm. The traditional Chinese herb is effective against asthenospermia. It's certain that large MAPK pathway subtype exist in the testicle of mammals. And there are various subtype in the Sertoli cell cell and spermatogenetic cell. It's reported that activate ERK can promote the sperm. Chinese traditional medicine holds the idea that kidney asthenia, blood stasis and damp heat are the basic mechanism of asthenospermia. So we uses kidney- tonifying, blood- promoting and dampness- expelling recipe combined with strong essence tablets for the treatment and it turns out to be effective. In additiontion, it can improve and adjust the functional index of rats' epididymis. However, we do not have a research on its effect on testicle organ. We apply modern molecular biology technology to analyze the quality of seminal fluid of rats with asthenospermia. Through ERK1/ 2MAPK pathway 's effect on Sertoli cell.

目前男性不育的研究多集中于生精功能障碍，但临床调查发现弱精症是导致男性不育的重要因素，关于弱精症的机理研究，主要关注精子的线粒体和核基因组，治疗方面中医药显示出很好的疗效。现已阐明哺乳动物睾丸组织中存在大量MAPK通路亚型，在支持细胞和生精细胞中均可检测到MAPK各亚型的存在，有文献报道激活ERK可增加精子的活动力。祖国医学认为肾虚、瘀血、湿热是弱精症的基本病机，我们以此制定补肾活血利湿大法，应用药物（强精片）治疗，临床效果满意，且对大鼠附睾功能性指标具有显著改善和调节作用，但未对其对睾丸组织的影响进行研究。我们拟应用现代分子生物学技术，研究强精片通过ERK1/2MAPK通路对睾丸支持细胞的影响进而改善弱精症大鼠精液质量的分子机制，为深入揭示该法改善精子质量的作用机理奠定理论基础。

弱精子症发病率高，近年来学者研究发现MAPK通路与精子运动力相关。本小组研制的强精片，临床效果好，故选择与精子活力密切相关的MAPK通路深入研究，为强精片临床应用提供理论支持。本课题研究强精片改善弱精子症大鼠精子质量作用机理，取附睾精子检测活力变化，检测精子中ERK1/2，免疫组织化学检测睾丸支持细胞波形蛋白，ELISA法测定睾丸支持细胞中TGF-β1含量，以精子活力变化对MAPK通路通过睾丸支持细胞调控精子活力评价。结果：①对照组、模型组、高、中、低剂量组A、B、C级精子百分率分别是26.01±4.74、4.84±0.50、25.11±3.37、24.45±2.69、22.6±2.42，19.68±6.68、8.84±2.1、24.04±8.48、22.60±6.48、16.09±4.18，19.84±2.71、8.62±3.21、21.97±12.44、22.75±10.49、13.63±8.88，模型组A级、B级、C级精子显著低于对照组（P＜0.01），高、中、低剂量组A、B、C级精子比例显著高于模型组（P＜0.01）。②模型组大鼠睾丸精母细胞，细胞核呈圆形，染色质分布均匀，胞浆内线粒体的脊断裂或消失，粗面内质网扩张；高、中、低剂量组大鼠睾丸精母细胞，细胞核呈圆形，染色质分布均匀，胞浆内线粒体、粗面内质网、核糖体等细胞器结构清晰，均与对照组类似。③对照组、模型组、高、中、低剂量组ERK1/2、波形蛋白平均光密度、睾丸组织细胞凋亡率、精液TGF-β1表达量分别为1.00±0.00、1.26±0.10、1.14±0.08、1.18±0.05、1.19±0.19，0.16±0.01、0.17±0.01、0.16±0.01、0.17±0.09、0.17±0.00，9.20±3.07、42.20±9.17、21.60±5.94、33.95±6.39、40.85±5.61，627.67±26.07、566.73±68.44、621.78±30.80、583.93±44.24、587.69±59.29。模型组睾丸组织内ERK1/2、波形蛋白表达量高于对照组（P＜0.01），模型组大鼠睾丸组织凋亡阳性细胞率较对照组明显升高（P <0.01），而精液中TGF-β1表达量低于对照组（P <0.05）；与模型组相比，高剂量组ERK1/2表达量、波形蛋白表达量均明显降低（P＜0.01