从Th9调控JAk1/STATs信号通路探讨润燥灵治疗干燥综合征的分子机制

Sjogren's syndrome(SS) is a common disease of autoimmune diseases, and It has a higher incidence. The core pathological manifestations of SS is the exocrine gland were damaged by infiltration of lymphocytes and plasma cells. The main clinical manifestations are dry mouth and eyes, besides, it can lead to multiple systemic damage. Based on ”Duyunxueyu”theory,we propose Runzaoling,it has a good curative effect to cure dry mouth and eyes, but its mechanism needs to be further clarified.Based on the literature and previous research, we find Th9 cells is a extraordinary CD4+ help T cell subgroup.Th9 cells secrete IL-9, IL-10 and other cytokines,it could effect CD4+T differentiate into different directions,and different immunomodulation effects were performed on other T cell subgroups under different conditions.Th9 cells participate in the development of multiple autoimmune diseases,and mediated cytokines play a key role in the pathogenesis of SS.For this, the team plans to use Runzaoling to treat the model mice of SS ,Th9,Th17and Treg cells To explore the therapeutic effect of Th9, Th17/Treg cells and JAK1/STATs in SS by Runzaoling, and to reveal the mechanism of Th9 cells in SS.

干燥综合征是自身免疫性疾病的常见病和多发病，具有较高发病率。其病理表现为外分泌腺受淋巴细胞和浆细胞浸润而受损。临床主要表现为口、眼干燥，并可累及全身多个系统损害。根据“毒蕴血瘀”理论，提出的润燥灵治疗本病，能较好改善SS患者口眼干燥等临床，但其机制有待进一步明确。基于文献及前期研究，发现Th9细胞是一种特殊的CD4+辅助性T细胞亚群，分泌IL-9、IL-10等细胞因子，能影响CD4+T细胞的分化方向，在不同条件下对其他T细胞亚群发挥不同的免疫调节作用，参与多种自身免疫性疾病的发生发展，其介导的相关细胞因子在SS的发病中起关键作用。为此，课题组拟运用润燥灵治疗干燥综合征模型小鼠，及润燥灵含药血清干预Th9、Th17及Treg细胞，探讨润燥灵调节Th9、Th17/Treg细胞和JAK1/STATs在干燥综合征中的治疗作用，揭示Th9细胞在干燥综合征中的作用机制。

第一部分：动物实验：根据SS的病理变化特点，制备SS小鼠模型，对NOD小鼠分组给药治疗后，应用HE染色、PCR、WB、ELISA、流式细胞仪方法分别检测全血、颌下腺组织。结果表明，润燥灵（RZL）高剂量组较SS组淋巴浸润较轻，无萎缩性腺体征象，与羟氯喹组比较，淋巴细胞浸润改善；润燥灵中、高剂量组小鼠IL-17A和RORγt mRNA表达明显降低；润燥灵可下调PU.1 mRNA的表达；颌下腺组织中IL-9和IL-17的表达显著降低，IL-10的表达显著提高；ELISA测量小鼠血清分泌因子的含量，结果显示，模型组小鼠血清IL-2和IL-17含量高于空白组，IL-4和PD-L2含量低于空白组，而IL-10和TGF-β在模型组中略高于空白组，润燥灵和羟氯喹治疗后，IL-2和IL-17含量降低，IL-4和PD-L2含量升高，而IL-10和TGF-β随着润燥灵和羟氯喹的加入含量升高。与对照组比较，模型组pJAK1/pSTAT3信号通路表达明显升高，羟氯喹和高剂量RZL可显著降低通路蛋白的表达。pJAK2/pSTAT5信号的表达与对照组相比，模型组的通路蛋白表达也显著增加。羟氯喹和高剂量RZL明显降低通路蛋白。此外，羟氯喹和RZL在mRNA水平上也观察到一定的调控作用。结果表明，润燥灵能够改善淋巴细胞浸润，可能是通过降低炎症因子IL-9和IL-17的表达，从而影响Th17细胞分化改善SS组织损伤和缓解炎症，为润燥灵治疗干燥综合征提供理论依据。.第二部分：细胞实验：分为诱导分化Th17组、诱导分化Th9组、润燥灵低剂量组、润燥灵中剂量组和润燥灵高剂量组，根据不同的细胞诱导条件分别进行诱导分化，PCR、WB检测IL-9，IL-10和IL-17及JAK/STAT的mRNA及蛋白表达。结果显示激活JAK1/2和STAT3/5信号通路可促进Th9和Th17的激活。RZL可干扰JAK1/2和STAT3/5的表达，降低Th9和Th17的分化，从而降低IL-9、PU.1、IL-17和RORα的表达。