SOCS3对TLR4的负调节及T细胞分化的调控作用及其对IgA肾病的影响

最新文献报道及我们的初步研究结果提示TLR4及T细胞分化异常与IgAN发病密切相关，IgAN是一类Th2占优势的疾病。SOCS是一种细胞因子信号传导的负反馈调节因子，对TLR4及T细胞的分化起重要调控作用。我们拟以促进Th2分化的SOCS3作为研究的主要对象，探讨其在IgAN发病机制中的作用：1.从临床水平明确IgAN患者体内SOCS3与T细胞分化、TLR4的关系，分析其与临床病理损害的相关性；2.建立SOCS3转基因小鼠，体内观察上调SOCS3表达对TLR4、T细胞分化、IgA1水平、肾脏损伤的影响；3.在细胞水平，采用基因转染技术上调SOCS3基因表达，观察其对B细胞分泌异常糖基化IgA1分子及肾脏系细胞增殖活化的影响。从而明确SOCS3在IgAN全身系统免疫及肾脏局部免疫中所起的作用，初探其可能机制，提示SOCS3对IgAN发生及发展的影响，为临床治疗IgAN提供新的靶点。

SOCS是一种细胞因子信号传导的负反馈调节因子，对TLR4及T细胞分化起重要调控作用。本项目研究中，我们主要探讨SOCS3在IgA肾病(IgAN)发生发展中的作用：1、临床病例研究：收集IgAN患者和正常人外周血PBMC，采用Real Time-PCR检测TLR4 、SOCS3 mRNA的表达量；Western blotting检测TLR4、SOCS3蛋白的表达量；免疫组化法观察检测TLR4、SOCS3在IgAN患者肾组织的表达定位半定量分析。结果：IgAN患者PBMC中TLR4、SOCS3蛋白的表达较正常对照组升高，其中TLR4蛋白表达量升高显著高于正常对照组。免疫组化显示TLR4、SOCS3在IgAN患者肾组织的肾小球、肾小管中的表达量明显高于正常对照组。肾组织TLR4表达与肾脏损害程度呈正相关, TLR4信号通路的激活可能在IgAN患者肾组织损伤中起重要作用；肾组织中SOCS3表达与肾脏病理损害指标呈负相关，肾组织中SOCS3过表达可能对IgAN肾损害起保护作用。2、动物模型体内观察：采用免疫诱导法建立IgAN小鼠模型，再以慢病毒体内转染SOCS3，RT-PCR检测脾淋巴细胞及肾组织SOCS3、TLR4 mRNA表达，Western blotting检测蛋白表达，免疫组化检测肾组织中SOCS3、TLR4、TGF-β1、MCP-1表达，ELISA检测血清TGF-β1、IgA浓度，流式细胞术检测Th1/Th2细胞分布比例。结果：IgAN小鼠脾淋巴细胞及肾组织中SOCS3及TLR4表达均升高，血清TGF-β1、IgA浓度增加，TLR4、TGF-β1可能促进IgAN的发展；体内过表达SOCS3后，可降低血清TGF-β1、IgA浓度水平，促进向Th2细胞偏移，抑制肾脏组织TLR4的表达，逆转IgAN小鼠的肝肾功能损害，提示SOCS3在IgAN的发生发展中起保护作用。3、通过体外实验，我们证实TGF-β1和IL-4均可促进人B淋巴细胞分泌IgA1，并影响IgA1的糖基化水平，在IgAN发病机制中起重要作用；体外上调SOCS3表达可抑制aIgA1刺激诱导的系膜细胞增殖，并下调TLR4和TGF-β1的表达，从而发挥对肾脏的保护作用。通过本研究，我们揭示了SOCS3在IgAN发生发展中的保护作用，为IgA肾病的治疗提供了新思路及基础依据。