拟南芥TANG1基因及其增强子EOT1在糖信号途径中的分子机理研究

Sugars not only serve as energy and cellular carbon skeleton but also work as signaling molecules regulating growth and development in plants. However, the molecular basis of sugar responses is largely unknown. In previous work, we isolated a sugar-hypersensitive mutant-tang1. The TANG1 gene was isolated by a map-based cloning approach, and encodes a previously uncharacterized novel protein. By yeast two hybrid screen, we identified TANG1’s interaction proteins. Based on these results, in this project, we hope to isolate tang1 enhancers (enhancer of tang1, eot). We cloned one of the enhancers’ gene, EOT1. EOT1 interacted with TANG1,which was identified by yeast two hybrid. Next, we will analyze the function of EOT1 in sugar responses in Arabidopsis, the interaction between the EOT1 and TANG1 in vivo. We also want to screen the EOT1 interaction proteins using yeast two hybrid analysis. Finally, we will do transcriptome analysis to gain insight of the regulation network of EOT1 and TANG1.

糖类物质不但是能量代谢和细胞骨架成分，还是重要的信号分子来调节植物的生长发育。但是由于糖代谢和糖信号的复杂性，我们对糖信号作用的分子机制了解的还不是很清楚。我们前期的工作分离了一个糖敏感的突变体tang1，基因克隆和功能分析发现，TANG1编码了一个功能未知的新蛋白，参与植物糖信号相关的生长发育调控。同时，通过酵母双杂交系统，我们分离了一个TANG1的互作蛋白，正在进行相关的功能分析。本项目在此基础上，希望通过筛选tang1的增强子（eot)，并对其中一个增强子eot1-1 进行深入分析。通过基因克隆，我们已经分离了EOT基因，并通过酵母双杂交证实它与TANG1互作。接下来，我们希望通过研究EOT1在糖信号中的功能，EOT1和TANG1的互作，EOT1的相互作用蛋白及EOT1和TANG1的转录调控网络等，增加对TANG1和EOT1在糖信号中的作用机制的认识。

糖类物质不但是能量代谢和细胞骨架成分，还是重要的信号分子来调节植物的生长发育。但是由于糖代谢和糖信号的复杂性，对糖信号作用的分子机制了解的还不是很清楚。我们前期的工作分离了一个糖敏感的突变体tang1，基因克隆和功能分析发现，TANG1编码了一个功能未知的新蛋白，参与植物糖信号相关的生长发育调控。为了进一步研究TANG1在糖反应中的分子机制，我们筛选了EMS诱变的拟南芥tang1-2突变体群体，获得了一些tang1-2的增强子，并选择其中表型强的一个增强子（eot1）深入研究了其在糖信号中的功能。在加糖的培养基上，EOT1基因单突变与野生型差别不大，但是它与tang1双突变体对糖的敏感性显著强于tang1单突变体，是tang1的增强子。糖诱导marker基因的表达及花青素的测定等进一步验证了这个结果。接下来，利用酵母双杂交及体内CO-IP实验，我们发现EOT1和TANG1在蛋白水平上存在互作。在此基础上，为了进一步分析它们的基因调控网络，我们还做了转录组分析。目前，我们已经发表一篇标注本项目资助的相关论文（Peng, et al. Nature Communications. 2018），同时正在整理新的相关实验数据，并撰写论文，希望很快发表，这些结果将进一步促进我们深入认识糖作用的分子机理。