树突状细胞(Dendritic cells,DCs)介导的黏膜免疫对猪轮状病毒(PRV)感染的分子作用机制研究

Porcine rotavirus (RV)can cause swine viral diarrhea and bring great harm to pig husbandry and human health，also as an important public health problem worldwide. But mucosal immunity mechanism caused by PRV si still unclear. The aims are to reveal TLR3 and NF-κB are the crucial molecular in the pathway of dendritic cells mediate mucosal immunity using gene knockout mouse as models.DCs' subsets and functions will be analzyed by flow cytometry, fluorescence quantitative PCR, immunofluorescence technology etc. Purpose is to elucidate the mechanism of DCs in mucosal immunity during RV infections and provide theoretical basis for immune protection procedure.

猪轮状病毒（Porcine Rotavirus,PRV）性腹泻给养猪和人类健康带来严重危害，已经成为全球一个重要的公共卫生学难题。目前猪轮状病毒感染和宿主黏膜免疫机制还不清楚。鉴于此，本研究拟利用猪轮状病毒感染基因敲除小鼠模型来揭示TLR3和NF-κB是启动树突状细胞（Dendritic cells,DCs）介导PRV感染发生肠道黏膜免疫效应的关键分子；应用流式细胞术、荧光定量PCR技术和免疫荧光技术等检测PRV感染对DCs亚群的数量变化和黏膜免疫功能的影响，旨在阐明DCs介导的肠道黏膜免疫作用分子机制，为猪轮状病毒的防治提供坚实的理论基础。

轮状病毒感染已成为全球性的健康问题，尽管各国研究人员对RV感染的特点、免疫反应及疫苗开发做了大量的研究，但RV感染宿主机体首先入侵肠道，诱导机体免疫应答又以肠道黏膜免疫为主，目前对肠道黏膜免疫机理尚未完全清楚。DCs作为目前已知的最重要的抗原递呈细胞，是肠道免疫系统中的重要组成部分起着连接固有免疫和获得性免疫的关键免疫分子作用。基金依照项目计划书从不对同方面研究了猪RV感染与DCs之间的相互作用机制，能对更好的了解机体抗RV感染黏膜免疫机制及有效预防RV感染的发生。（1）PRV和poly(I:C)体外感染IPEC-J2细胞，观察感染前后对TLR3、NF-κB及多种细胞因子的表达变化，探讨PRV感染对IPEC-J2细胞分子致病机制，表明PRV能刺激诱导IPEC-J2细胞中TLR3、NF-κB的上调并影响多种细胞因子的表达。（2）PRV体外刺激BMDCs，研究PRV刺激对BMDCs活化成熟的影响及对TLRs信号通路和影响，结果表明PRV刺激能促进BMDCs的活化成熟，通过TLR2和TLR3信号通路促进NF-κB活化促进多种细胞因子的分泌，且PRV刺激能促进同种异体淋巴细胞的增殖能力促进Th1类细胞反应。（3）PRV 感染BALB/c小鼠，检测PRV感染小鼠对小鼠脾脏、MLN和PPs中DCs亚群分化和成熟状态研究，结果表明PRV感染可诱导小鼠脾脏、MLN和PPs中DCs向CD11c+CD11b+CD8α+DC、CD11c+CD11b+CD8α-DC、CD11c+B220+CD8α+DC、 CD11c+B220+CD8α-DC亚型分化，并且树突状细胞发育成熟，进而引起机体的免疫反应。（4）研究了鼠李糖乳杆菌对猪轮状病毒感染BALB/c小鼠DCs分化与发育影响，检测了LGG免疫BALB/c小鼠后灌胃PRV前后对小鼠脾脏和MLN中DCs的分化和成熟的变化、对NF-κB和TLR3及多种细胞因子变化的影响，阐明了LGG免疫后感染PRV能促进机体分泌TLR3和NF-κB及其它细胞因子，从而激活TLR3与NF-κB通路增强机体固有免疫反应。