Cbl-b在丙型肝炎患者T细胞失能中的作用机制研究

T细胞免疫是清除和阻止HCV感染的决定性因素，然而HCV感染中的T细胞失能阻碍了机体对HCV的清除。E3泛素连接酶Cb1-b是近年发现的首个直接参与T细胞活化和耐受的E3连接酶。研究表明，很多感染性疾病中Cb1-b都发挥免疫负调控作用。本课题组发现，HCV患者PBMC中Cb1-b mRNA和蛋白表达均高于健康人，提示Cbl-b可能与HCV感染中T细胞失能密切相关。本项目拟通过定量检测丙肝患者T细胞中Cbl-b及其相关分子，分析其表达及其调控因素；通过检测相关信号转导分子和p85蛋白的泛素化水平，分析Cbl-b表达变化对下游信号通路的影响及其与T细胞免疫活性的关系；通过增强或抑制HCV患者T细胞中Cbl-b的表达，进一步证实其对下游免疫分子调控的影响。从而揭示Cb1-b在HCV患者T细胞失能中的作用及规律，为全面阐明HCV感染时T细胞失能的机制提供实验依据，为抗HCV治疗提供新的思路和方法。

T细胞免疫是清除和阻止HCV感染的决定性因素，然而HCV感染中的T细胞失能阻碍了机体对HCV的清除。E3泛素连接酶Cb1-b是近年发现的首个直接参与T细胞活化和耐受的E3连接酶。研究表明，很多感染性疾病中Cb1-b都发挥免疫负调控作用。本项目拟通过定量检测丙肝患者T细胞中Cbl-b及其相关分子，分析其表达及其调控因素，分析Cbl-b表达变化对下游信号通路的影响及其与T细胞免疫活性的关系；通过增强或抑制HCV患者T细胞中Cbl-b的表达，进一步证实其对下游免疫分子调控的影响。我们的研究发现：慢性丙型肝炎患者外周血PBMC Cbl-b、CD28和CTLA-4 mRNA水平均较健康对照组分别升高1.38倍、1.90倍和2.68倍，其中，CTLA-4在慢性丙型肝炎组中的升高与对照组相比，差异具有统计学意义（t=2.314，P=0.028）。HCV 1b基因型患者外周血Cbl-b、CD28和CTLA-4 mRNA水平较2a基因型分别升高1.74倍、1.51倍和2.81倍，其中Cbl-b（t=2.241，P=0.04）和CTLA-4（t=2.569，P=0.022）的升高具有统计学意义。丙肝患者外周血中CD4+CD25+CD127low/- Treg占CD4+细胞的比例较健康对照着明显升高，同时，CD14+单核细胞表面TLR2和TLR4的表达也较健康对照着明显升高。Treg在1b型患者中所占比例较2a型明显升高，但TLR2和TLR4的水平在1b型和2a型患者之间未见明显差异。通过功能学实验研究发现，Treg在体外具有明显的细胞抑制功能。增强Cbl-b的表达可明显增强T细胞中PLC-γ，PCK-θ和Rap-1 mRNA的表达水平，同时细胞杀伤功能减弱。本研究发现Cb1-b在HCV患者T细胞失能中的发挥重要作用，为全面阐明HCV感染时T细胞失能的机制提供实验依据，为抗HCV治疗提供新的思路和方法。