纳米粒子介导的microRNA-132基因质粒对大鼠腹主动脉瘤的影响及分子作用机制

国内外研究已证实microRNA（miRNA）在血管疾病的发生发展中起重要作用。我们前期的研究显示，miR-132在大鼠腹主动脉瘤（AAA）中异常表达，并可以调节VSMC的增值及IGFBP6等靶基因。最近研究表明，miRNA在小鼠上可以通过病毒转染的方式治疗肺癌。但miRNA基因治疗在血管疾病的应用尚未见报道。本项目首次探讨利用纳米粒子介导的miR-132在CaCl2及胶原酶共同诱导的大鼠AAA模型的作用，内容包括：（1）观察包载miRNA基因制备纳米级粒子的转染效率及可行性；（2）体外：观察miR-132基因质粒转染后对主动脉血管平滑肌细胞生物学特性的影响（3）体内：研究纳米粒子介导的miR-132基因质粒对大鼠AAA的影响。（4）探讨miR-132在大鼠AAA形成过程的作用机理。本研究从miR-132这个新视点进一步为揭示AAA的发生机制奠定基础，为血管疾病的基因治疗提供新的思路。

在执行期间，本课题组在上海交通大学药学院进行纳米载体构建相关实验，在此期间开发了一个由温度引起的聚乙二醇（PEG）水相/多糖的水相乳液的方法制备加载多糖纳米粒子干扰素α-2b（IFNα-2b），在此基础上本课题组利用纳米载体技术，构建了一种持续释放的粒细胞集落刺激因子（G-CSF）微球制剂，使用一种新型固体的油中的油包水（S / O / O / W型）技术，用于控制释放中的G-CSF。另外，本课题组成功的对下肢静脉功能不全进行了miRNA的筛选和鉴定;在第二年度中，利用前期的纳米载体技术包载miR-132基因，在包载过程中，我们发现miR-132约有10%的包载率，本课题组在多次尝试miR-132改进PLGA纳米载体，经过多次实验仅有10%的转染效率，在转染至细胞我们通过电镜发现细胞内纳米载体转染率不理想，无法进一步行转载基因质粒；在第三年度中，我们采用慢病毒携载miR-132质粒，转染至平滑肌细胞中，经过PCR及western blot检测发现miRNA-132的升高促使了MMP-9的升高，同时现miRNA-132的升高使得平滑肌细胞迁移增加，这些成果说明了MiRNA-132在腹主动脉瘤具有一定的作用,miRNA-132对靶基因的调控仍在继续研究；另外，我们发现细胞钙化在腹主动脉瘤中起到了很大的作用，我们继续研究miRNA在钙化细胞中作用，我们通过诱导培养原代平滑肌细胞，成功培养出钙化的平滑肌细胞，通过Agilent高通量的芯片筛选，找到了一些具有差异的miRNAs;另外，我们通过我院血管外科激光治疗静脉畸形治疗中期结果，相关文章发表在血管外科权威杂志“Eur J Vasc Endovasc Surg.”上。